广西巴马小型猪apoe的表达、真核载体构建及功能验证

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1、分类号S墨13：3UDC硕士学位论文密级广西巴马小型猪却DE的表达、真核载体构建及功能验证苏秀珍学科专业动塑遑篮直弛皇繁殖指导教师郭亚莶数援论文答辩日期2Q13生鱼月三旦学位授予日期答辩委员会主席夔塑生硒究虽广西大学学位论文原创性和使用授权声明本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献

2、均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。日不保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名砺、鹰嗡指导教师签名：行乡鸟L作者联系电话：?研．『-779瑶绍日期：汐f

3、多罩‘玛。功目日期LI弓．参．加电子邮箱：砧了2／7伽@吮．∞肌广西巴马小型猪和DE的表达、真核载体构建及功能验证摘要阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease，AD)是继心脏病、肿瘤、中风之后，成为人类死亡的第四大死因，严重危害到老年人身体健康。研究发现，载脂蛋白E(apolipoproteinE，ApoE)与AD高度相关。因此，本研究以广西巴马小型猪为研究对象，测定了．4poE在不同组织、不同年龄和大脑不同部位的表达模式；构建4pDE真核表达载体并对其功能进行验证，同时进行转ApoE基因小鼠的生

4、产，为后续构建广西巴马小型猪AD动物模型的研究奠定基础。根据GenBank公布的猪ApoEcDNA序列设计特异引物，利用RT-PCR(1"leversetranscriptionPCR，RT-PCR)分析广西巴马小型猪ApoE在心、脾、肝、肾、胰和脑等组织中的表达情况，并测定了ApoE在不同年龄(10，14，24，>24月龄)猪脑组织中的表达模式。结果发现／／poE在脑和胰腺中的表达最高；老年(>24月龄)猪脑组织中ApoE的表达量高于其它年龄；免疫组化的结果显示，ApoE在前脑皮质的表达量高于海马组织。将

5、ApoEcDNA序列克隆到pMDl8．T载体，双酶切并连接构建彳pDE真核表达载体pEGFP-C1．ApoE，利用PKl5和PCI2细胞对载体的功能进行了验证。结果显示，在两种细胞中都检测到绿色荧光，证明真核表达载体pEGFP．C1．ApoE在PKl5和PCI2细胞中均能正常表达目的蛋白。为了进一步验证重组质粒的功能，将质粒注入小鼠睾丸，自然交配获得57只F1代小鼠，PCR检测获得阳性小鼠2只，转基因阳性率为3．5％。关键词：广西巴马小型猪阿尔茨海默病动物模型载脂蛋白ECONSTRUCTIONANDFUNC

6、Tl0NAI，ANAI．YSISOFEIⅨARYOTICEXPI己ESSIONVECTOROFAPOE，ANDTHEANAIYSIS0FEXPRESSIONPROFⅡ正SINGUANGXIBAMAⅣ田m-PIGABSTRACTAlzheimer'sdisease(AD)hasbecamethefourthseriousdiseaseleadingtothehumandeathexceptingforheartdisease，cancer,andapoplexy．Previousstudyindicatedt

7、hattherewerehighlycorrelatedboththeexpressionofapolipoproteinE(ApoE)andtheAD．Therefore，theobjectiveofcurrentstudyistoanalyzetheexpressionprofilesofApoEindifferenttissues，ages，andthedifferentregionsinbraininGuangxiBamamini—pig．Theeukaryoticexpressionvectoro

8、fApoEWasconstructedandthefunctionofrecombinantplasmidwasidentified．Meanwhile，thetransgenicmicewereconductedwiththemethodofinjectiondirectlyinovariesandtestes．Thestudywillmakepreparationfortheconstructionofani