临床医学论文阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用.doc

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1、临床医学论文•阻断Stathmin基因高表达对成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用【摘要】目的探讨Stathmin基因的反义核酸(AS-ODN)对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用。方法以高表迖Stathmin的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin(AS-ODN)为阻断剂，通过MTT试验观察AS-ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用，流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响。结果AS-ODN能明显抑制成骨肉瘤细胞的生长(P<0.05)・SOSP-9607在AS・ODN作用下，细胞分裂阻滞在分裂期的中期，并诱导细胞发生凋亡。结论Stathmin基因的反

2、义核酸(AS-ODN)对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重耍的作用，它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点。【关键词】Stathmin基因；反义核酸；成骨肉瘤细胞[Abstract]ObjectiveToinvestigatetheinhibitionofAS-ODNofStathmingeneonculturedhumanosteosarcomacell1ines・MethodsWithSOSP・9607ofhumanosteosarcomaccl1linesofhighexpressionfortargetcel1andAS-ODNforblockingagent

3、,theinhibitoryeffectsofAS-ODNonculturedhumanosteosarcomacel11ineswasobservedbyusingMTTmethod・TheinfluenceofcelIproliferationcyclewasanalyzedwithf1owcytometer.ResultsThegrowthofosteosarcomacellsweresuppressedbyAS-ODN(P<0.05).TheactionofSOSP-9607onAS・0DNandtheccl1divisionwasblockedi

4、nmetaphaseandinducercellapoptosis・ConclusionTheAS・ODNofStathmingenemayplayacrucialroleinthegrowthofosteosarcomacells,anditmightbethenewtargetoftreatmentforosteosarcoma.[Keywords]stathmingene;antisenseoligonucleotide(AS・0DN);osteosarcomaeel11ines成骨肉瘤(osteosarcoma)是人类最常见的原发性恶性骨肿瘤，好发

5、于股骨远端及胫骨近端〔1〕，死C率和致残率很高。成骨肉瘤的发生可能为多重染色体畸变的结果〔2〕，最终导致癌基因激活或抗癌基因失活，两者均导致细胞生长调节控制信号的紊乱。正是由于这些关键性基因的差异表达导致了骨肉留细胞分化的失控°Stathmin(又称为opl8、pl8、pl9、Prosolin及Mctablastin)为一种高度保守的细胞内蛋白。WaiIon等〔3〕认为抑制Stathmin的活性对细胞纺锤体形成至关重要，从而起到抑制细胞生长作用，阻断Stathmin的生物学功能有可能成为肿瘤治疗的重要措施之一〔4〕。本硏究用人工合成的互补于Stathmin

6、基因的反义核酸(AS-0DN)?阻断Stathmin高表达的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607，探讨对其生长抑制作用，为临床更有效治疗成骨肉瘤捉供理论和实验依据。1材料与方法1.1材料•人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为本硏究所建立〔5〕。反义Stathmin核酸(AS-0DN)及用于对照的正义S-ODN合成于上海博亚生物技术有限公司，基因序列全硫代修饰：S-0ND:5•-ATGGCTTCTTCTGATATCCAGG-3*;AS-OND:5'-GGATATCAGAAGAAGCCAT-3*c台盼蓝为上海化学试剂分装厂分装。紫杉醇由北京益普四坏医药公司提供。

7、1.2方法1.2.1MTT试验（测定AS-ODN对SOSP-9607细胞生长的抑制作用）取对数生长期的SOSP-9607细胞，调节细胞密度为5xl04/ml，各取0.2ml加入96孔板中，分别标记正义组、反义组。正义组和反义组分别加入终浓度均为20/zmol/L的S-ODN和AS-ODN。每组设3个复孔，培养后1、2、3、4进行台盼蓝染色细胞计数，计算生长抑制率〔（对照组细胞数■处理组细胞数）/对照组细胞数〕。1.2.2流式细胞仪分析流式细胞仪（FCM）分析采用Nicollctti氏法。将终浓度为20/zmol/L的S・ODN和AS-ODN与SOSP-96

8、07细胞共同培养3天后，离心，去培养液，DBS洗涤2次，0.2ml