stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用

《stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、Stathmin基因反义核酸对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用摘要:目的探讨Stathmin基因的反义核酸（AS-ODN）对人成骨肉瘤细胞系的生长抑制作用，并观察与化疗药物合用后的协同作用.方法以高表达Stathmin的人成骨肉瘤细胞系SOSP-9607为靶细胞、反义Stathmin（AS-ODN）为阻断剂，通过MTT试验观察AS-ODN对成骨肉瘤细胞的生长抑制作用及与紫杉醇（PTX）的协同作用，流式细胞仪分析细胞增殖周期的影响.结果AS-ODN及AS-ODN与PTX联合应用均明显抑制成骨肉瘤细胞的生长（P<0.05，P<0.01）.SOSP-9607在AS-ODN作用下，细

2、胞分裂阻滞在分裂期的中期，并诱导细胞发生凋亡.结论Stathmin基因的反义核酸（AS-ODN）对成骨肉瘤细胞的生长可能起十分重要的作用，它有望成为成骨肉瘤治疗的新靶点，与抗癌药联合应用有协同作用.　　Keyingene;antisenseoligonucleotide（AS-ODN）;osteosara;cellline　　Abstract:AIMToinvestigatetheinhibitionofAS-ODNofStathmingeneonculturedhumanosteosaracelllinesandtoobservethesynergisticactionicaldru

3、gs.METHODSHumanosteosaracelllinesSOSP-9607，in，an　osteosaracelllinesandthesynergisticactionethod.Theinfluenceofcellproliferationcycleeter.RESULTSThegroetaphaseandcellapoptosisingenemayplayacrucialroleinthegroaybetheneenttoosteosaraandhavethesynergisticactionicaldrugs.　　0引言　　成骨肉瘤（osteosara）是人类常见的原

4、发性恶性骨肿瘤，死亡率和致残率很高［1］.成骨肉瘤的发生可能为多重染色体畸变的结果［2］，最终导致癌基因激活或抗癌基因失活，两者均导致细胞生长调节控制信号的紊乱.正是由于这些关键性基因的差异表达导致了骨肉瘤细胞分化的失控.Stathmin（又称为op18，p18，p19，Prosolin及Metablastin）为一种高度保守的细胞内蛋白.TT试验（测定AS-ODN及AS-ODN与PTX联合应用对SOSP-9607细胞生长的抑制作用）取对数生长期的SOSP-9607细胞，调节细胞密度为5×107L-1各取0.2mL加入96孔板中，分别标记正义组，反义组，及联合用药组.正义组和反义组分别

5、加入终浓度均为20μmolL-1的S-ODN和AS-ODN;联合用药组加入终浓度为0.1μmolL-1的PTX和同上终浓度的AS-ODN，每组设3个复孔，培养后1，2，3和4d进行台盼蓝染色细胞计数，计算生长抑制率［（对照组细胞数一处理组细胞数）/对照组细胞数］.　　1.2.2流式细胞仪分析流式细胞仪（FCM）分析采用Nicolletti氏法.将终浓度为20μmolL-1的S-ODN和AS-ODN与SOSP-9607细胞共同培养3d后，离心去培养液，DBS洗涤2次，0.2mLPBS重悬SOSP-9607细胞，用吸管快速吹打进预冷的700mLL-1乙醇中，4℃保存，检测前离心去乙醇，碘化

6、丙啶染色15min，上机检测.所用流式细胞仪为EpicsElite（美国），汞激光激发波长为488nm.结果分析软件为Elite4.0和DNAMultictycle.　　统计学处理:数据以x±s表示，显著性差异采用t，χ2检验.　　2结果　　与正义组相比，反义组及联合用药组对SOSP-9607细胞生长均具有明显的抑制作用，联合用药抑制作用更明显，统计分析有显著性差异（P<0.05，P<0.01）.联合用药组抑制率明显高于单独用药（反义组）（P<0.05，Tab1，Fig1）.　　表1不同时间药物对SOSP-9607细胞生长的影响　略　　图1用药后细胞生长曲线　略　　细

7、胞周期分布分析:AS-ODN（20μmolL-1）处理细胞3h后，可见细胞G2/M期百分比增高;至48h，G2/M期百分比达55.5%.亚二倍体峰（sub-G1）表示DNA降解，又称细胞凋亡峰，在72h，Sub-G1期细胞占9.2%，提示细胞凋亡发生（Tab2）.S-ODN（20μmolL-1）处理组未见出现亚二倍体峰.　　表2AS-ODN（20μmolL-1）处理SOSP-9607细胞不同时间的DNA含量　略　　3讨论　　反义基因疗法是目前肿