成骨肉瘤组织中stathmin基因的表达意义论文

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1、成骨肉瘤组织中stathmin基因的表达意义论文曲建波张惠中马保安范清宇张正旭【关键词】成骨肉瘤,.freelin;原位杂交;成骨肉瘤摘要:目的明确stathmin基因在人成骨肉瘤组织有高表达并对其进行组织学定位.方法用地高辛标记全长stath-min基因，原位杂交方法检测stathmin基因在45例人成骨肉瘤组织及10例正常组织中的表达情况.结果在45例成骨肉瘤组织中有24例stathmin基因呈阳性表达（阳性率53%），阳性颗粒可见于胞质及胞核;10例正常组织中2例呈弱阳性表达，差异显著（P0.05）.结论Stathmin基因在

2、骨肉瘤中的高表达与骨肉瘤的发生、发展有重要的相关性，该基因有望成为人成骨肉瘤生物治疗中的重要靶基因.Keyin;insituhybridization;osteosaraAbstract:AIMToobserveoverexpressionofstathmingeneanditslocalizationinthetissueofosteosara.METHODSTheoverexpressionofthestathmingeneinedin45osteosaraspecimensbyinsituhybridiza-tioningen

3、eplifiedfromK562cellsbyRT-PCRmethod.RESULTSOverexpressionofstathmingeneandnuclear.Among10casesofnormaltissue，only2shoingenebetaltissue.CONCLUSIONOverexpreesionofstathmingenemayplayakeyroleinthepathogenisisanddevelopmentofosteosarco-ma.Itmaybeaveryimportantbiotherapytar

4、getinthetreat-mentofosteosara.0引言成骨肉瘤（osteosara）是常见的恶性程度极高的骨源性肿瘤，5a存活率不足20%［1］.Stathmin（又称Op18.freelin基因高表达.我们应用地高辛标记的全长stathmin基因为探针，原位杂交（insituhy-bridization，ISH）方法检测其在多种成骨肉瘤组织中表达情况.1材料和方法1.1材料本研究所手术取骨肉瘤组织标本45（男33，女12）例，年龄8～43岁，另选正常组织标本10例.标本经40gL-1甲醛固定，石蜡包埋，厚5μm连续切片

5、，病理确诊，骨母细胞型18例，软骨母细胞型13例，纤维母细胞型14例.1.2方法全长stathmin基因的RT-PCR扩增:Trizol法提取K562细胞总RNA，反转录合成cDNA第一链（Gibico公司反转录试剂盒及说明），常规PCR扩增stathmin基因，所用引物如下（合成于上海博亚生物技术公司）:上游引物:5’-CATATGGCTTCTTCTGATATCCAG-3’;下游引物:5’-CTCGAGTTAGTCAGCTTCAGTCTCGTC-3’.PCR反应体系为:模板cDNA5μL，10×PCR缓冲液5μL，10mmolL-

6、1dNTP2μL，10nmolL-1-1引物5μL及TaqDNA聚合酶1μL，加水至50μL，于94℃30s，58℃30s，72℃40s，反应35个循环.采用15gL-1低溶点琼脂糖凝胶电泳分离并回收PCR产物中480bp条带（Fig1）.探针标记:Digoxigenin标记盒购于德国BoehrigerMannheim公司，标记过程按说明书进行.所用杂交试剂为博士德公司试剂盒，杂交步骤按说明书进行.切片常规脱蜡至水，加5mLL-1过氧化氢甲醇液封闭内源性过氧化物酶，胃蛋白酶消化暴露核酸，每块组织切片分别滴加20μL杂交液（10mgL

7、-1）杂交过夜，滴加封闭液，加鼠抗地高辛抗体，分别滴加生物素化的羊抗鼠二抗和ABC复合物后DAB显色.常规脱水、透明、封片.对照实验分别用已知阳性的K562细胞甩片同步染色作为阳性对照;以PBS液替代抗地高辛抗体作为阴性对照.阳性对照为阳性，阴性对照为阴性.以细胞质或胞核呈棕黄色为阳性细胞，每例切片均至少观察5个具有代表性的高倍视野.图1RT-PCR扩增全长stathmin基因电泳回收结果略统计学处理:以SVSTA统计软件进行χ2检验.2结果在骨肉瘤45例标本中24例stathmin基因呈过表达，阳性率53%，10例正常组织中仅2例

8、呈弱阳性反应，阳性颗粒可见于胞质及胞核（Fig1，2）.Stath-min基因在人成骨肉瘤组织和正常组织中的表达存在显著性差异（Tab1，P0.05）.Stathmin基因在不同病理类型成骨肉瘤中的阳性表达率无显著差异（P0.05，F