cmyc 反义核酸对乳腺癌MCF7细胞生长及hTERT基因表达的影响.doc

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1、cmyc反义核酸对乳腺癌MCF7细胞生长及hTERT基因表达的影响作者：马莉,税青林,张莉娟,彭春,赵小平【摘要】目的探讨脂质体介导cmyc基因反义寡核苷酸（Antisensephosphorothioateoligodeoxynucleotide，ASODN）对MCF7细胞生长及其人体端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT）基因表达的影响。方法将cmyc正、反义寡核苷酸（ODN）分别导入各组MCF7细胞中，MTT法、逆转录聚合酶链法及流式细胞术分别检测各组细胞生长情况、hTERTmRNA的表达水平以及细胞凋亡率。

2、结果cmycASODN转染MCF7细胞24h后，细胞生长受到抑制（P＜0.05），并且hTERTmRNA表达明显降低；随着反义核酸作用时间的延长，凋亡细胞数目逐渐增多，细胞生长及hTERT表达的下降随时间延长逐渐明显。对照组、LRSODN组、LRASODN24h组与LRASODN48h、72h组相比有明显统计学差异（P＜0.05）。结论cmyc反义寡核苷酸能显著下调细胞中hTERT基因的表达活性，诱导MCF7细胞凋亡，并抑制MCF7细胞生长；在一定程度上，其效果与时间呈正相关。【关键词】乳腺肿瘤；cmyc；人端粒酶逆转录酶；反义核酸；MCF7细胞　　Abstract：

3、ObjectiveToinvestigatetheeffectsofcmycASODNonMCF7cellsgrowthandtheexpressionofhTERTgeneinMCF7cells.MethodsAftertransfectingcmycSODNandASODNtoMCF7cells,wemeasuredtheproliferation,apoptosisratesandtheexpressionofhTERTmRNArespectivelybyMTTmethod,flowcytometryanalysisandRTPCR.ResultsWhencmycAS

4、ODNaffectedMCR7cellsat24h,cellsgrowthwasinhibitedsignificantly(P＜0.05)withhTERTgeneexpressionofMCF7cellsdescendingsignificantly(P＜0.01).TheapoptosisratesoftheASODNtreatedcellsrisedsignificantlyat48h.Thedescribedeffectsofsuppressiononcellsrisedwithtimeincreasing.ConclusioncmycASODNcaneffective

5、lyinhibittheMCF7cellsgrowth,induceapoptosis,anddownregulatehTERTgeneexpressioninMCF7cell.Theeffectscorrelatedwithtimetoadegree.　　Keywords：Breastneoplasms;cmyc;Humantelomerasereversetranscriptase;AntisenseOligonucleotide;MCF7cell　　0引言6端粒酶是维持染色体结构和功能稳定的一种核糖核蛋白复合体，在几乎所有的人类恶性肿瘤细胞中均高表达[1]。其最重要的成分

6、是人端粒酶催化亚单位，又称人端粒酶逆转录酶（humantelomerasereversetranscriptase，hTERT），被认为是端粒酶激活的限速因素。随着hTERT基因克隆[2]成功，对其的调控研究成为端粒酶研究的重点。cmyc是一类参与细胞增殖与分化的原癌基因，通过基因扩增、逆转录酶插入和染色体易位等方式表达失调，在大多数的肿瘤中都有高水平的表达[3，4]，并且cmyc是第一个被发现的调节hTERT基因表达的重要转录因子[5]。许多研究报道，在恶性肿瘤细胞中cmyc与hTERT的表达密切相关。Oh等[5]报道，与正常细胞相比，myc蛋白在肿瘤细胞中表达显著增高；激活或抑

7、制myc蛋白表达可以改变hTERT启动子活性，认为myc蛋白对hTERT启动子的调节作用可能与其促进肿瘤形成有关。而目前也有研究显示[6]，cmyc与hTERT的表达调控无明显相关性。由此可见，研究者们对于cmyc与hTERT的表达调控关系仍持不同意见。本研究选用cmyc和hTERT均高表达的乳腺癌MCF7细胞，采用LipfectAMINETM介导的反义核酸技术将cmyc反义核酸转染入MCF7细胞，观察细胞生长抑制、细胞