高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱分析紫甘蓝和羽衣甘蓝中花色苷.pdf

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究简报第3期2011年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry419～424DOI：10．3724／SP．J．1096．2011．00419高效液相色谱一四极杆飞行时间质谱分析紫甘蓝和羽衣甘蓝中花色苷刘玉芹1'2江婷赵先恩杨国栋杜金华王晓(山东农业大学食品科学与工程学院，泰安271018)(山东省分析测试中心，山东省大型精密仪器应用技术重点实验室，济南250014)(山东农业大学作物生物学国家重点实验室，泰安271018)摘要应用高效液相色谱一电喷雾／四极杆飞行时间串联质谱联用技术分析了紫甘蓝和羽衣甘蓝

2、中的花色苷成分。选用AgilentTCC。色谱柱(250mm×4．6mm×5rtm)，二元线性梯度洗脱，柱后流出液采用电喷雾四极杆飞行时间质谱的正、负离子模式进行检测。根据一级质谱的分子离子和二级质谱碎片离子，获得化合物的准确分子量信息，与相关文献报道进行比较，分别从紫甘蓝和羽衣甘蓝中分离并检测到了l6种和17种花色苷，且从紫甘蓝和羽衣甘蓝中发现了锦葵一3一(P香豆酰基)一芸香苷。本方法快速、准确，无需标准品。关键词高效液相色谱一电喷雾／四极杆飞行时间质谱；紫甘蓝；羽衣甘蓝；花色苷1引言紫甘蓝(BrassicaOleraceaL．var．capitataL．)又称红甘蓝，是十字花

3、科芸苔属甘蓝种中的一个变种，营养成分高于普通甘蓝，作为一种食用性蔬菜在我国已大面积种植l】。羽衣甘蓝(BrassicaOleraceavaracephalaD．C．)，也是十字花科芸苔属甘蓝类的一个变种，叶色鲜艳，作为一种高营养、易栽培的新兴蔬菜，很有开发价值。紫甘蓝和羽衣甘蓝均富含花色苷类化合物。花色苷属酚类化合物中的类黄酮，是果蔬及产品呈现从红色到蓝色的物质基础，具有抑制血小板凝固，预防血栓、心脏病，抗癌，抗氧化等多种生理功能，且富含花色苷的果蔬还可作为天然色素的良好来源【61。目前，国内对紫甘蓝花色苷的报道主要集中在提取方法和稳定性研究”，分离鉴定研究较少；国外对紫甘蓝花色

4、苷的分离研究仅见矢车菊类花色苷。1，尚未见羽衣甘蓝中花色苷类化合物的分离鉴定报道。高效液相色谱一质谱联用技术适用于天然产物有效成分定性与定量分析，可以在缺少标准品的情况下对粗提物中微量成分进行有关的结构分析，具有高效快速、灵敏度高等优点[111。本研究利用高效液相色谱一电喷雾／四极杆飞行时间串联质谱联用技术(HPLC—ESI／QTOF—MS／MS)对紫甘蓝和羽衣甘蓝中花色甘类化合物进行分析，得到花色苷类物质的分子量和分子结构的碎片信息，以期分析测定紫甘蓝和羽衣甘蓝中的花色苷成分，为今后紫甘蓝和羽衣甘蓝中花色苷的开发奠定了基础。2实验部分2．1仪器与试剂AUW220D电子分析天平(

5、日本岛津公司)；KQ3200型超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；TC—C高效液相色谱柱(250mm×4．6mm×5gm，美国Agilent公司)；6520四极杆飞行时间串联液质联用仪(Q—TOF,美国Agilent公司)。紫甘蓝和羽衣甘蓝购于山东济南某农贸市场。HC1、甲酸、甲醇和乙酸乙酯(分析纯，天津市广成化学试剂有限公司)；乙腈(色谱纯，山东禹王实业有限公司)；水由超纯水设备(美国Mili—Q公司)制备。2．2实验方法2．2．1样品提取新鲜紫甘蓝和羽衣甘蓝在4℃打浆，分别准确称取20．og，各加入60mL甲醇溶液2010-04-12收稿

6、；2010-0801接受本文系国家自然科学基金项目(No20872083)和作物生物学国家重点实验窒开放课题项目(No．20082KF05)资助Email：wangx@keylab．net420分析化学第39卷(含0．1％(v／v)HC1)，室温下超声3次，每次15min。布氏漏斗真空抽滤，滤渣分别再用40mL甲醇溶液(含0．1％HC1)重复提取两次，3次滤液合并，45℃下真空浓缩去除甲醇，分别用水(含0．01％HCI)定容至10mL，备用。2．2．2样品纯化将10mL花色苷提取液吸附在XAD-7大孔吸附树脂上，以水(含0．01％HC1)淋洗柱子，去除吸附的糖、蛋白等水溶性物质，

7、直至水溶液澄清为止。再用甲醇溶液(含0．01％HCI)洗脱花色苷，收集，45℃真空浓缩，用0．01％HC1定容至10mL，过0．45um微孔滤膜，待测。2．2．3色谱质谱条件AgilentTC—C色谱柱，二元梯度洗脱，流动相A为水(含0．4％甲酸)，B为乙腈。0min，90％A；O～35min，10％～18％B；35～60min，18％B；60～70min，18％～100％B。进样10“L，流速1mL／min，柱温25℃，检测波长520nm。离子源API—ESI，正、负离子检测模