超高效液相色谱四极杆飞行时间串联质谱法

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1、第39卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第9期2011年9月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1323～1328DOI:10．3724/SP．J．1096．2011．01323超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱法同时分析奶粉中9种雌激素*王和兴周颖姜庆五(上海复旦大学公共卫生学院公共卫生安全教育部重点实验室，上海200032)摘要建立了奶粉中9种雌激素(雌三醇、β-雌二醇、α-雌二醇、马烯雌甾酮、17α-乙炔雌二醇、雌酮、己烯雌酚、己二烯雌酚、己烷雌酚)的超高

2、效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱(UPLC-Q-TOF-MS)分析方法。样品用水溶解，乙腈超声提取雌激素，正己烷除脂，NH2柱净化，经WatersACQUITYUPLCHSST3色谱柱(100mm×2．1mm×1．8!m)分离，采用电喷雾离子源(ESI)负离子模式，对9种雌激素进行Q-TOF分析。分析时间13min，线性范围为0．001～0．5mg/L;检出限(S/N=3)为0．11～0．30!g/kg，定量限(S/N=10)为0．37～1．0!g/kg。考察了对9种雌激素精确质量数的测定能力和用基质内标法

3、定量的回收率和精密度。9种雌激素的测定质量数与理论值误差在－1．0～0．9mDa之间。在添加水平分别为1，2，10和100!g/kg时，平均回收率为61%～137%，RSD为1．0%～22．6%。采用本方法对市售的7种奶粉进行检测，未发现上述9种雌激素。关键词超高效液相色谱-四极杆飞行时间串联质谱;QuEchERS方法;雌激素;奶粉1引言奶粉是人们生活中重要的食品之一，与人们的健康息息相关。由于近年来不断发生的奶粉安全事件，因此奶粉安全问题备受关注。雌激素作为内分泌干扰物之一，有研究表明儿童性早熟，男性前列腺

4、［1，2］癌，妇女乳腺癌和子宫癌发病率的上升与食品中雌激素的残留有关。我国农业部在2002年第193号公告里禁止性激素和具有雌激素样作用的物质在食品动物中的使用。但是在经济利益驱动下，违规滥用［3］这类物质的情况仍然很多;同时有研究表明:奶牛在养殖过程中，可能会引起牛奶中内源性雌激素的［4］升高。因此，为保障食品的安全，内源性和外源性雌激素的同时检测就显得很重要。［5，6］食品中雌激素常用的检测方法是气相色谱-质谱联用法(GC-MS)和液相色谱-质谱联用法(LC-［7～12］MS)。GC-MS虽然分离效果好，

5、但是雌激素挥发性低，需要衍生化，操作繁琐。LC-MS因为灵敏度［13］高，选择性好，样品前处理相对简单而成为雌激素检测的主要方法。超高效液相色谱(UPLC)相对［14］LC分离效果好，分析速度快，非常适合于多组分快速检测。飞行时间质谱(TOF-MS)能够进行分子量的精确测定，适合复杂基质中组分的准确定性，因此UPLC-TOF-MS成为复杂基质中多组分残留的有［15］［7～9］［5，7，10］［11，12］［6］效分析方法。目前检测的样品多为牛奶、动物肌肉、血液和尿液等，所采用的样品［16］处理方法大多操作复杂

6、。本研究借鉴QuEChERS方法中快速提取的部分原理，结合正己烷除脂及NH2柱净化，建立了奶粉中9种雌激素的超高效液相色谱-四极杆串联飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF-MS)检测方法，并成功用于实际样品的检测。2实验部分2．1仪器与试剂ACQUITYTM超高效液相色谱仪、SYNAPTG2高分辨率飞行时间质谱仪(美国Waters公司);2200T超声波清洗器(上海安谱公司);TGL-10B高速台式离心机(上海安亭公司);KD200氮气吹扫仪(杭州奥盛公司);NH2固相萃取柱(500mg，3mL)、中性氧化铝固

7、相萃取柱(500mg，3mL)、12位固相萃取仪2010-11-29收稿;2011-06-08接受本文系国家“十一五”科技支撑计划(No．2006BAI19B02)和复旦大学09年青年基金(No．EYF201023)资助*E-mail:yingchou@fudan．edu．cn1324分析化学第39卷(德国CNW公司)。乙腈、纯水、乙酸乙酯、甲醇(LC-MS级，美国Fisher公司);NaCl(优级纯，上海国药集团);雌三醇、氘代β-雌二醇、β-雌二醇、α-雌二醇、马烯雌甾酮、17α-乙炔雌二醇、雌酮、己烯雌

8、酚、己二烯雌酚、己烷雌酚(纯度大于97．8%，美国Sigma公司)。标准溶液:分别称取标准品10．0mg于10mL棕色容量瓶中，用甲醇定容，得1．0g/L标准储备溶液于－20℃保存;用乙腈-水(10∶90，V/V)稀释，得到1mg/L混合标准溶液，然后逐级稀释得到所需浓度混合标准工作溶液。2．2色谱-质谱条件WatersACQUITYUPLCHSST3色谱柱(100mm×2．1mm×1．8!m);流