高效液相色谱-电感耦合等离子质谱法分析雄黄在大鼠脏器中代谢的砷形态.pdf

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1、第42卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第3期2014年3月ChineseJournalofAnalyticalChemistry349～354DOI：10．3724／SP．J．1096．2014．30991高效液相色谱．电感耦合等离子质谱法分析雄黄在大鼠脏器中代谢的砷形态陈绍占杜振霞“刘丽萍姜泓。(北京化工大学理学院，北京100029)(北京市疾病预防控制中心，北京100013)(中国医科大学公共卫生学院，沈阳110001)摘要采用HPLC．ICP．MS联用技术建立了大鼠脏器中AsB，As0田D

2、，MMA，DMA和As(、7)等砷形态的分析方法。采用超声水浴提取对样品进行前处理，DionexIonPacAS19阴离子交换柱，20mmol／L(NH)：CO(pH9．7)为流动相，对雄黄染毒后大鼠肝肾中的砷形态进行分析。实验表明，方法不受Arcl+干扰，常见的5种砷形态化合物的线性范围为1～300L，相关系数(R)均大于0．999，检出限为0．3～0．5(g／L)，RSD均小于5％，加标回收率为83．8％～111．7％。通过对肝肾的形态分析，表明经雄黄染毒后大鼠肝脏中的砷形态主要为DMA、As0叩D和未

3、知物2；肾脏中的砷形态主要为DMA、MMA、As0田D、未知物1、未知物2和未知物3。综合表明，此方法适用于雄黄代谢后的主要砷形态分析。关键词雄黄；砷形态；脏器；高效液相色谱一电感耦合等离子质谱1引言近年来，中药慢性中毒问题受到人们的高度重视。中药雄黄在我国传统医学中有着悠久的历史，具有解毒杀虫，燥湿祛痰，截疟等功效J。2010年版《中国药典》规定雄黄饮片中AsS的含量应不低于90％，并对AsO的量进行了限制。现代医学研究表明，雄黄在治疗白血病J、癌症等恶性疾病方面也有不错的疗效。尽管雄黄具有这种独特的疗效

4、，但由于其属于含砷矿物药，使其具有一定的毒性，而其毒性大小与砷的化学形态密切相关-63。Rana等报道了，砷暴露可通过干扰抗氧化防御系统和减小SOD2的基因表达，从而对肝、肾造成损伤。目前，测定砷形态的分析方法主要有高效液相色谱与电感耦合等离子质谱联用技术(HPLC—ICP．MS)～10]、高效液相色谱与氢化物发生．原子荧光联用技术(HPLC—HG—AFS)l，J、高效液相色谱与氢化物发生一原子吸收联用技术(HPLC．HG—AAS)13]、毛细管电泳与电感耦合等离子质谱联用技术(CE．ICP—MS)，J、高

5、效液相色谱与电喷雾离子质谱联用技术(HPLC．ESI．MS)，主要用于食品等领域的测定，未见在雄黄代谢中应用的报道。本实验建立了HPLC—ICP．MS测定雄黄在大鼠肝肾中代谢砷形态的方法，为研究雄黄在大鼠体内的代谢提供支持，同时考察了样品前处理过程中砷形态之间的转化，并运用此法对雄黄在大鼠肝、肾中代谢后的砷形态进行了初步研究，为进一步研究雄黄的药代动力学提供合适的方法。2实验部分2．1仪器与试剂1200型高效液相色谱仪及7500a型电感耦合等离子体质谱仪(ICP—MS，美国Agilent公司)；Dionex

6、IonPacAS19阴离子交换柱(250mm×4mm，10m)；Milliplus2150超纯水处理系统(美国Millipore公司)；数控超声清洗器(昆山禾创超声仪器有限公司)；高速冷冻离心机(美国贝克曼公司)。(NH)：CO，，NH，·H：O，H：O：(30％)、冰醋酸、NaC1均为优级纯；砷标准物质：亚砷酸根离子[As锄]、砷酸根离子[As(V)]、一甲基砷(MMA)、二甲基砷(DMA)、砷甜菜碱(AsB)，均购于中国计量科2013—10—15收稿；2013—11-16接受{E-mail：duzx@m

7、ail．buet．edu．cn；liulp@bjcdc．org35O分析化学第42卷学研究院。超纯水(电阻率18．2Mft·era)。2．2质谱与色谱条件ICP．MS条件：RF入射功率1450W，载气为高纯氩气，载气流速0．65L／min，辅助气流速0．45L／min，射频电压1．72V，采样深度7．8mm，泵速0．3r／s，检测同位素As和"Cl。HPLC条件：DionexIonPacAS19阴离子分析柱；流动相：20mmol／L(NH4)2CO3(pH=9．7)；流速：1．2mL／min；柱温为室温；进

8、样体积：25。2．3染毒方法取4周龄Wistar大鼠4只，体重(50±10)g。分为低、中、高剂量组，给药剂量分别为0．3，0．9和2．7g／kg(以0．5％CMC为混悬介质)，对照组给予0．5％CMC(羧甲基纤维素钠)，雄黄染毒组灌胃给药，每天灌胃1次，连续6星期。染毒期间每3天称重1次，调节灌胃剂量。实验动物室温度(24±1)℃，相对湿度(50_+5)％，每天12h光照，动物可自由摄食摄水。于末次给药2h后用