超高效液相色谱三重四极杆质谱法同时快速测定血浆和尿液中11种杀鼠剂.pdf

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1、第38卷分析化学(FENXIHUAXUE)研究报告第1O期2010年10月ChineseJournalofAnalyticalChemistry1411—1416DOI：10．3724／SP．J．1096．2010．01411超高效液相色谱三重四极杆质谱法同时快速测定血浆和尿液中11种杀鼠剂蔡欣欣张秀尧(温州市疾病预防控制中心，温州325001)摘要建立了血浆和尿液中11种杀鼠剂同时测定的超高效液相色谱串联质谱方法。血浆样品经乙腈沉淀、尿液样品经乙酸乙酯萃取，氮吹浓缩后用初始流动相复溶，在UPLC

2、BEHC。柱上以甲醇-4mmol／L乙酸铵为流动相进行梯度洗脱分离，负离子电喷雾多反应监测模式检测，基质标准外标法定量分析。血浆和尿液中11种杀鼠剂的加标回收率分别在68％～118％和62％～104％之间；日内相对标准偏差分别为5．6％～2l％和4．1％一18％；日间相对标准偏差分别为8．5％一26％和7．1％～25％(n=6)。除尿液中安妥的定量限为5L外，其余待测物的定量限均为1g／L。本方法灵敏度高，操作简单，适于中毒病人的快速诊断检测。关键词超高效液相色谱三重四极杆质谱法；杀鼠剂；血浆；尿

3、液1引言抗凝血类杀鼠剂按化学结构可分4．羟基香豆素类和茚满二酮类，主要有杀鼠灵、杀鼠迷、氯杀鼠灵、鼠得克、大隆、溴敌隆、氟鼠灵、呋杀鼠灵、敌鼠和氯敌鼠。由于它们具有高效、广谱、毒性相对较低，不易引起二次中毒，且有特效解毒药等特点，己广泛应用于野外和室内杀鼠工作。但近几年来由于使用与管理不当，人和牲畜中毒及投毒事件常有发生。安妥属硫脲类杀鼠剂，中毒时主要分布在肺、肝、肾和神经系统，可造成肺毛细血管渗透性增加，引起肺水肿、胸腔积液、肺出血，也可引起肝肾脂肪变性坏死。抗凝血类杀鼠剂的测定方法主要有高效液

4、相色谱法。血液和尿液样品常采用乙酸乙酯液液萃取，二极管阵列(紫外)检测器检测，方法的检出限在0．016～1mg／L之间¨J。采用浊点萃取浓缩人尿样品28倍，二极管阵列检测器检出，检出限可达0．001～0．016mg／L_oJ。荧光检测法检测4一羟基香豆素类抗凝血类杀鼠剂，检出限在0．001～0．05mg／L’卜lo]。液相色谱质谱联用法具有优异的灵敏度和定性能力，己用于抗凝血类杀鼠剂的确证检测。关福玉等⋯利用APCI．SIM负离子模式测定血液和尿液中4种杀鼠剂，检出限分别为1～5L和0．5～2．5

5、g／L；文献[12]采用ESI一离子阱串联质谱正离子方式检测血浆样品中3种香豆素类杀鼠剂，检出限为1～10L；杨士云等采用ESI一三重四极杆质谱MRM正离子模式检测血液中溴敌隆，检出限达1LLl。安妥的分析只有显色反应的定性实验。本实验建立了UPLC—MS／MS同时测定血浆和尿液中11种杀鼠剂的方法，简便、准确和灵敏度高。2实验部分2．1仪器与试剂AquityUPLC—QuattroPremierXE超高效液相色谱-串联质谱仪配有电喷雾源，Masslynx4．1工作站(美国Waters公司)；MS

6、2旋涡混旋器(德国IKA公司)；HUP一100手持式超声波细胞破碎仪(天津恒奥科技发展有限公司)；N—EVAP氮吹仪(12孔，美国Organomation公司)；TGL一16C高速台式离心机(上海安亭科学仪器厂)；GradientAIOMill—Q超纯水器(Millipore公司)。乙腈和甲醇(HPLC级，德国Merck公司)；乙酸铵(HPLC级，Fluka公司)；安妥(99％)、敌鼠(99．O％)、氯敌鼠(96．0％)、杀鼠灵(98．0％)、杀鼠迷(98．5％)、氯杀鼠迷(99．0％)、鼠得克(

7、97．5％)、大隆(98．5％)、溴敌隆(98．5％)、氟鼠灵(99．4％)和呋杀鼠灵(100mg／L)标准物质均购自德国2010-02-22收稿；2010-04-20接受本文系温州市医学重点学科、温州市第三轮“311”工程建设项目基金(No．2008012)资助E-mail：xyzwz123@126．tom分析化学第38卷Dr．EhrenstorferGmbH公司，固体标准物用甲醇配制成1．0g／L标准贮备溶液，再稀释成混合标准使用液，保存于一35℃冰箱中。冰冻人血浆购自温州市中心血站，空白尿液

8、来自志愿者。2．2色谱-质谱条件ACQUITYUPLCBEHC】8色谱柱(100mm×2．1mm，1．7m，Waters公司)，配在线过滤器；流动相A为4mmol／L乙酸铵，流动相B为甲醇。梯度洗脱程序：0～3．0min，流动相由40％B线性梯度至9o％B，保持2min后，流动相又回到40％B，并平衡2min；流速0．250mL／min；柱温45oC；进样体积10。电喷雾离子源，负离子多反应监测(MRM)模式。ESI毛细管电压3．0kV；离子源温度120oC；锥孔反吹气流量50L／