嗜盐菌纤维素酶的酶学性质及产酶条件优化研究.pdf

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1、万方数据OptimizationofFermentationConditionforHalophilesCellulaseandEnzymaticCharacterizationThesissubmittedtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementFortheDegreeofMasterofScienceZhaoKun(CollegeofLifeScience)Supervisor：AssociateProf．LuWeidongQingdao．ChinaJune，2012万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文

2、是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：恕嘶I时间：>句}海多R力＆关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部

3、分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：起叶时l'Mipf广年6只茹B新硌多幼＼帆矽僻∥啪万方数据1万方数据青岛农业大学硕士学位论文摘要嗜盐菌纤维素酶的酶学性质及产酶条件优化研究摘要纤维素是自然界中最广泛存在的一类碳水化合物，同时也是地球上含量最丰富的可再生资源。纤维素以其易被微生物降解并进入生物圈碳循环途径，且不对生态环境构成破坏，被广泛应用于纺织、造纸、食品、建筑、油田化学和生物化学等多个领域。本文以采集于青岛市胶州湾盐场以及内蒙古内陆盐湖的泥样为样品，以羧甲基纤维素钠为唯一碳源的MHC培养基作为筛选平板，筛选得到产纤维素酶细菌菌株34株，放线菌菌株9株。对HC值和

4、酶活力较高的两株茵LS．A18菌株和放线菌DN．A4菌株分别进行生理生化实验及16SrRNA序列分析，并通过对菌株产酶条件及培养条件、纤维素酶酶学性质的研究，以期达到高效利用纤维素的目的。高产纤维素酶嗜盐细菌LS．A18菌株为Marinimicrobium属，命名为MarinimicrobiumSD．LS．A18。经过研究发现，该菌株所产纤雏素酶的最适反应温度和pH值分别为55℃和pH7．O。LS．A18菌株产酶的最适碳源和氮源分别为低粘度CMC和尿素。经过对LS．A18菌株发酵条件的优化，纤维素酶活力达到2．5U／mL，是优化前的3．1倍。通过非变性凝胶电泳研究发现LS．A18菌株株所

5、产纤维素酶有55KDa、32KDa和21KDa三务电泳条带。该酶在60℃条件下，水浴保温1h，剩余酶活力为84％，而在pH5．0．11．0的缓冲液及浓度为0％．25％的NaCl溶液中，室温保存72h，剩余酶活力仍达到88％以上，说明，该酶耐盐、耐热和碱稳定性酶。另外，金属离子Na+、K+、ca+对于酶的活性有促进作用，而金属离子Z112+、Mn2+、以及抑制剂溶液EDTA对酶活性抑制作用，乙醇对于酶的活性没有影响。去污剂溶液SDS、．TritonX．100、Tween．20H92+对酶活性有强烈的抑制作用而p．巯基高产纤维素酶菌株DN-A4为Nocardiopsis属，定名为Nocard

6、iopsissp．DN-A4。经过研究发现，该菌株所产纤维素酶的最适反应温度及pH值分别为55"C和pH7．0～7．5。DN．A4菌株的最适产酶碳源及其浓度分别为低粘度CMC和5％，最适氮源及浓度为0．1％明胶，最佳接种量为6％，培养基中初始pH值、NaCl浓度及装液量分别为pH7．0、1％NaCl以及装液量80ml／250ml。通过DN．A4放线菌产纤维素酶的稳定性测试发现，该酶的具有较强热稳定性、盐度稳定性及pH稳定性。关键词：纤维素酶；嗜盐菌；细菌；放线茵1万方数据青岛农业大学硕十学位论文AbstractOptimizationofFermentationConditionforM

7、arineMicrobialCellulaseandEnzymaticCharacterizationAbstractCelluloseisthemostwidespreadmaterialsinnatureasaclassofcarbohydrates．andalsoisthemostabundantrenewableresourcesonearth．Cellulosecanbedegradedeasilybymicroorgan