镉诱导小鼠血清和家蚕中肠蛋白表达谱的变化.pdf

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1、镉诱导小鼠血清和家蚕中肠蛋白表达谱的变化CadmiumInducedtheChangesofProteinExpressioninMiceSerumandSilkwormMidgut姓2014年6月独创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已注明引用的内容以外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果，也不包含为获得江苏大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人

2、完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：副潮诱2014年06月10日学位论文版权使用授权书江苏大学、中国科学技术信息研究所、国家图书馆、中国学术期刊(光盘版)电子杂志社有权保留本人所送交学位论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致，允许论文被查阅和借阅，同时授权中国科学技术信息研究所将本论文编入《中国学位论文全文数据库》并向社会提供查询，授权中国学术期刊(光盘版)电子杂志社将本论文编入《中国优秀博硕士学位论文全文数据库》并向

3、社会提供查询。论文的公布(包括刊登)授权江苏大学研究生处办理。本学位论文属于不保密学位论文作者签名：_三蝴2014年06月10日指导教师签名：2日江苏大学硕士学位论文摘要镉作为重金属的一种，具有很强的生物毒性。自然界中的镉分布十分广泛，包括陆地，海洋，空气以及生活在这些环境中的植物，动物，水生生物等。近年来，随着经济的发展，工业化程度越来越高，由工业排污引起的环境污染也越来越严重，镉污染就是其中一个。这些镉进入水体，土壤等，再经过食物链进入人体。镉的半衰期很长，且不容易排出体外，容易在体内富集，损伤人体的

4、各个器官以及免疫系统、神经系统，对人体健康造成严重影响。自第一例镉中毒事件发生以来，国内外的研究人员对镉的毒性进行了广泛的研究，基本弄清了镉的吸收以及镉产生毒性作用的生物过程，但是，镉代谢及调控过程的具体机制尚不清楚。所以，在本研究中，我们选用小鼠和家蚕为研究材料，利用二维电泳结合质谱技术，通过蛋白质组学分析小鼠血清和家蚕中肠中镉诱导的蛋白变化，再结合荧光定量PCR和Westemblot，进一步验证这些蛋白基因水平上的变化和蛋白水平上的变化，从而找出潜在的与镉中毒有关的蛋白标志物。此研究在镉中毒的预防和检

5、测方面有着极其重要的作用，并为下一步深入探讨镉中毒的分子机制提供了依据。目前研究得到以下结果：1．给小鼠喂食含有不同浓度镉的食物，模拟镉污染的环境，观察记录小鼠的存活情况。结果表明，对照组和10ppm组小鼠没有发现任何异常情况，发育良好；102ppm和i03ppm组的小鼠出现了行动迟缓，活动量减少的情况，而雄性小鼠104ppm组在喂养一周后全部死亡。选用对照组和102ppm镉处理组的血清进行下一步的实验。通过二维电泳对小鼠血清进行差异蛋白表达谱的分析，再经质谱分析，鉴定出8个差异蛋白，分别为载脂蛋白A．I

6、V(ApolipoproteinA．IV，O．61倍)，妊娠带蛋白(Pregnancyzoneprotein，0．73倍)，载脂蛋白A-I前体(ApolipoproteinA．Iprecursor，0．30倍)，视黄醇结合蛋白(Retin01．bindingprotein，0．73倍)，淀粉体P成分前体(amyloidP-componentprecursor，2．96倍)，载脂蛋白E(ApolipoproteinE，5．02倍)，载脂蛋白C．III前体(ApolipoproteinC．IIIprecurs

7、or，兰10倍)，载脂蛋白A．II(ApolipoproteinA．II，兰10倍)。通过实时荧光定量PCR分析这些差异蛋白基因在肝脏组织中的表达情况，发现有三个蛋白的表达情况与二维电泳结果不一致，再通过Westernblot进一步验证这三个蛋白的表达情况，结果与二维电镉诱导小鼠血清和家蚕中肠蛋白表达谱的变化泳结果一致。2．以家蚕为实验材料，从三龄起开始添食含有不同浓度镉的食物，观察记录存活情况，结果表明，镉含量超过10ppm的几个组的家蚕出现生长缓慢，体表颜色变暗的情况，并且100ppm以上的几个组，三

8、天之后就开始出现死亡。我们选用对照组，lppm处理组和10ppm处理组进行二维电泳差异蛋白表达谱的分析，经过质谱鉴定，分别得到14个和6个差异蛋白。通过GO分析，我们发现这些蛋白主要参与了能量代谢，膜蛋白的运输和吞噬等生物过程。关键词：镉生物毒性，蛋白质组学，质谱分析，载脂蛋白II江苏大学硕士学位论文AbstractCadmiumhasas仃ongbiologicaltoxicityasaheavymetal．Cadmiumd