浅析神经干细胞的鉴定、增殖分化调控与培养.doc

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1、浅析神经干细胞的鉴定、增殖分化调控与培养摘耍：神经生物学的重婆进展Z—是发现神经干细胞的存在，它们在体外可以被生长因子诱导而增殖，并保持分化成神经元、星形胶质细胞和少突胶质细胞的潜能，移植后能在宿主的神经纽织屮牛存、整合和分化，并且基因转染后可表达外源基因产物，科研工作者正试图从神经干细胞所具有的这些属性来探讨将神经干细胞作为屮枢神经系统的发冇、神经系统移植以及神经系统替代治疗的理想材料。关键词：神经T细胞；增殖分化；细胞分化，神经元1神经干细胞的鉴定根据国外Lcndah的报道，神经干细胞冇一种中间丝状蛋白，也就是指的巢蛋白

2、或者神经上皮十细胞蛋白，其实是一•种特有的生物学标记，F1前它被广泛地应用于神经干细胞的免疫组织化学鉴定，这是因为在成熟神经元和胶质细胞中并无此蛋白表达°Nestin蛋白的表达始于神经胚形成时，主要分布于细胞的胞浆和突起，当神经细胞的迁移基本完成后，NeS七in蛋片的表达量便逐渐减少，并随着神经干细胞分化的最示完成而停止表达。5一滨脱氧尿普(BromodCoxyuridine,Brdu)K实就是一种胸腺嚓咙脱氧核昔类似物，它在细胞增殖周期中的DNA合成期嵌入DNA中，因此可被用于检测分裂细胞，证实新生细胞的存在，Brdu阳性

3、增殖细胞大多是反应性增牛:细胞及过披性增殖细胞，Brdu是一•种经常使用的增殖细胞标记物。在免疫组织化学实验中比较常用的还冇Musashil,它其实就是一种神经元的RNA结合蛋白，迄今为止已发现它基木存在于各种动物，它也被用于鉴定神经干细胞的存在。国外也有报道曾经使用鼠单克隆抗体进行实验，结來就发现Mabl4HI和14B8抗体能识别各种脊椎动物大脑内的神经干细胞。另外，早期实验指出CD133其实也是神经干细胞的基本标记(Cenmarker)之一。CD34虽然是肝干细胞和造血干细胞的标记，到目前为止并未见CD34在神经干细胞屮

4、的表达。事实上，由于神经干细胞/而体细胞多处于原始静止状态，这种状态下，它的一•些特界性标记(抗原)未能表达，因而如何有效确定神经干细胞的标记，进而客观、合理鉴定神经千细胞，仍存在一些困难。UChida等曾经从人胚胎屮分离出了所谓的神经干细胞，他所使用的方法其实就是抗细胞表面标志抗原和荧光激活的细胞筛选法。口前，有众多的神经干细胞研究领域的科学家止在集中于神经干细胞鉴定方面的研究，预期在不久的将来，将能寻找到神经干细胞更为特界性的标记物，也必然能通过一定的方法将处于最原始、静止状态的神经T细胞分离、鉴定出來。2神经干细胞增殖

5、、分化的影响、调控因素早在1992年，Reynold和WeiSS就利用内皮生长因子(epidermalgrowthfaCtor,EGF)成功培养了成年哺乳动物的神经干细胞。RIChardS和Johc等人则利用碱性成纤维细胞生长因子(basiCfibroblastgrowthfaCtor,bFGF)培养出成年鼠的神经干细胞。Angela等比较了这两种有丝分裂调控因子的不同点，验证了两者之间的线性关系，发现来源于室管膜下区的神经T细胞在培养时对两者的反应无显著差开;但如果细胞于EGF中生长缓慢时，加入bFGF可促进细胞增殖的速度

6、;反Z亦然。Shilnazaki等曾证实LIF对培养神经干细胞具有促进增殖和抑制分化的作用。国外Winkler认为神经干细胞具有向星形胶质细胞分化的趋向性，这可能也是通常情况下神经十细胞处于静息状态但当神经组织损伤后神经干细胞主要向星形胶质细胞分化参与胶质瘫痕形成的原因。但是含血清完全培养基的成分复杂，不便于我们研究细胞因了对神经千细胞分化的特异性作用，而无血清条件培养基的建立则解决了这一问题，BFGF、EGF与BDNF、GDNF、工GF等対神经T细胞分化有明显作用的细胞因子和比它们无组织來源的特异性存在于体内的多种组织屮，

7、对多种纽织细胞均有明显的促进存活和増殖作川，也是目前用于扩增不同部位神经干细胞常用的丝裂原。研究表明经bFGF或EGF扩增的神经干细胞在分化方向上冇明显差异，bFGF作用的了代细胞分化后大多数表达神经元特异性抗原标记NSE和MAP一2,IfljEGF作用的子代细胞分化后大多数为胶质细胞前体细胞。当前有一种观点认为，神经干细胞之所以能在休内分裂、增殖并分化，有赖于在发育过程屮对其进行精确调控的某种时空模式，当然，这一过程也必然依赖于各种生长因了的协同作用。BFGF和EGF是两种较为广谱的神经营养因子，根据研究结果，认为它们既能

8、促进细胞分化，也能决定细胞分化，当然它们还是有丝分裂原，BFGF和EGF生长因子作用的神经干细胞最终多数会分化形成r一氨基丁酸能的神经元。张晓梅等观察到bFGF与EGF联合应丿IJ可以直接诱导神经干细胞向神经元和星形胶质细胞分化，尽管分化的比例每个细胞团均有所不同，但是星形胶质细胞数量始终