斑马鱼少突胶质细胞调控因子Lingol的基因表达和功能鉴定.pdf

《斑马鱼少突胶质细胞调控因子Lingol的基因表达和功能鉴定.pdf》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在应用文档-天天文库。

1、中圈绅誊技求犬誊博士学位论又斑马鱼少突胶质细胞调控因子Lingol的基因表达和功能鉴定作者姓名：学科专业：导师姓名：完成时间：殷梧神经生物学胡兵教授二。一四年二月UniversityofScienceandTechnologyofChinaAdissertationfordoctor’SdegreeGeneExpressionandFunctionaIIdentifiCatiOnOfO¨gOdendrOCyteRegulatorLingo1inZebrafishAuthor’sName：Specialitv：——●，一●bupervlsor

2、：Finishedtime：肋YinNeurobiology一一Prof．BingHuFebruary,2014中国科学技术大学学位论文原创性声明本人声明所呈交的学位论文，是本人在导师指导下进行研究工作所取得的成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含任何他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：签字日期：五!笙!篁!盈中国科学技术大学学位论文授权使用声明作为申请学位的条件之一，学位论文著作权拥有者授权中国科学技术大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权按有关规定向国

3、家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文编入《中国学位论文全文数据库》等有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。本人提交的电子文档的内容和纸质论文的内容相一致。保密的学位论文在解密后也遵守此规定。幺开口保密(——年)作者妊塑盥翩签签字日期：盈他埠签字日期：型生：篁：兰呈摘要复杂的神经系统都是由神经元和胶质细胞这两种主要的细胞类型构成的，而髓鞘化则是一种胶质细胞粘附到神经元轴突上并引发质膜极化形成多层髓鞘的包裹过程。中枢神经系统(centralnervoussystem，

4、CNS)由少突胶质细胞负责髓鞘化，而外周神经系统(peripheralnervoussystem，PNS)的髓鞘化则是由施旺细胞完成。常见的中枢神经系统脱髓鞘疾病，例如多发性硬化症(multiplesclerosis，MS)，是一种由中枢神经系统遭到免疫系统攻击而引发的髓鞘损伤和轴突缺失的神经退行性疾病。为了探索中枢神经系统脱髓鞘的原因并寻找有效的治疗方法，需要进一步研究发育过程中的髓鞘化和脱髓鞘化。LINGO．1蛋白是一种由富亮氨酸重复序列(Leucine．richrepeat，LRR)、免疫球蛋白结构域(immunoglobulindo

5、main，Ig)和轴突生长抑制蛋白(neuriteoutgrowthinhibitoryprotein，Nogo)受体相互作用蛋白1构成的中枢神经系统跨膜蛋白，是少突胶质细胞分化的负调控因子。在多种动物模型中，靶向抑制LINGO．1可以促进神经元存活、轴突再生、少突胶质细胞分化和再髓鞘化。尽管在啮齿类动物模型上的研究加深了对LINGO．1的了解，但是在斑马鱼(Daniorerio)神经发育和髓鞘化过程中，其作用还不清楚。本文旨在研究lingol基因表达的时空模式及Lin901b蛋白在斑马鱼发育中的作用。首先我们使用生物信息学方法分析了斑马鱼

6、lingol基因的分子结构。相对哺乳动物，斑马鱼同源lin901有两个基因拷贝：lingola和lin901b。斑马鱼Lingolb蛋白具有类似哺乳类的蛋白结构并可能在中枢神经系统中发挥作用，在脊椎动物中也是高度保守的。利用体外合成lin901基因的地高辛(digoxin，DIG)标记的RNA探针，我们通过整体原位杂交(whole—mountinsituhybridization，WISH)技术分析了lingol基因表达的时间和空间模式。通过实时荧光定量PCR(real—timequantitative-polymerasechainrea

7、ction，Q—PCR)分析和蛋白免疫印迹(westernblot，WB)分析进一步发现斑马鱼lingolb基因的mRNA表达始于受精后1天(daypost—fertilization，dpf)，而蛋白表达始于2dpf。在斑马鱼lin901b的反义吗啡林(morpholinooligonucleotide，MO)基因敲减实验中，我们首先体外合成了含有MO靶向序列的绿色荧光蛋白(greenfluorescentprotein，GFP)报告mRNA序列以及Lingolb蛋白抗体以分析基因敲减的特异性和效率。对4dfp斑马鱼lin901b的M01

8、基因敲减后的表型进行分析，发现对Lin901b蛋白的表达抑制会导致例如黑色素减少、眼睛萎缩和脊椎(spinalcord，SC)弯曲等发育异常，暗示了其对神经系统发育的影响。通过透