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1、XX大学毕业论文树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响2014年6月25日树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响作者：于振海孙毅张璐萍阚氏海刘蛟黄飞【摘要】n的观察树胶脂毒素对体外培养大鼠脊神经背根神经节神经元的影响。方法对Wistar胎鼠背根神经节神经元行原代培养，采用100nmol/L浓度的树胶脂毒素对培养的神经元进行处理，运用MTT比色法和细胞形态学分析法,观察树胶脂毒素对神经元存活及形态的影响。结果背根神经节神经元存活率降低，神经元呈簇状聚集明显，细胞轮廓增强，胞体缩小，突起断裂或变短甚至消失。结论100nmol/L浓度的树胶脂毒
2、索对背根神经节神经元有损伤作用。【关键词】树胶脂毒素；背根神经节；神经元[Abstract]ObjectiveToobservetheinfluenceofresiniferatoxinonthedorsalrootganglionofrat.MethodsThedorsalrootganglioncellculturemodelwasfound,disposedwiththeresiniferatoxininthedensityof100nmol/L,andthenusethemethodofMTTandobservedthecell'smorph
3、ologicchange.ResultsTheresiniferatoxinreducethesurvivalofthecell.Cellgatheredobviously,cellbodybecamesmaller,cellprocessesfaultedorshortenedorevendisappeared.ConclusionThedensityofthe100nmol/Lresiniferatoxincandamagethedorsalrootganglioncells.【Keywords】resiniferatoxin,dorsalroo
4、tganglion,neuron膀胱灌注辣椒辣索在临床上主要用于治疗下尿路症状(lowerurinarytractsymptom,LUTS)o近年来辣椒辣素的类似物树胶脂毒素(resiniferatoxin,RTX)由于疗效好、副作用轻，逐渐取代了辣椒辣素。RTX是从大戟色素体树脂屮提炼出来的一种超强的，具有与辣椒辣素相似的生物学活性的物质，其通过与初级传入神经元上的辣椒索受体(vanilloidreceptor1,VR1)结合，引起膀胱传入纤维脱敏，从而减少感觉纤维的传入，发挥其对下尿路症状的治疗作用。虽然RTX在膀胱灌注治疗下尿路症状的临床应用屮
5、没有发现致癌或促进肿瘤生长作用，但是其远期安全性仍然是未知的。临床最关心的是RTX对膀胱的传入神经是否有损伤，传入神经的胞体位于脊髓背根神经节。为此，本研究利用体外建立胎鼠背根神经节神经兀培养模型,采用临床膀胱灌注浓度的RTX对培养的背根神经节神经元进行处理，观察在此浓度下背根神经节神经元的存活率及形态学改变，从而探讨其对背根神经节神经元的影响，为临床应用RTX膀胱灌注治疗下尿路症状的用药安全性提供一定的理论及实验依据。1材料与方法1」试剂和仪器DMEM/F12培养基，胎牛血清均购自GIBCO公司，树胶脂毒索(resiniferatoxin,RTX)
6、购自美国LKT公司，MTT、多聚赖氨酸购自Sigma公司，OlympusCKX41型倒置和差生物显微镜由滨州医学院形态学实验室提供。1.2DRG(背根神经节)神经元的培养在无菌条件下，取胚龄为15d胎鼠30只,在解剖显微镜下取每只胎鼠的背根神经节，每只胎鼠可得到30个左右的背根神经节。在解剖显微镜下，用显微外科银子和手术刀移去神经节外膜和神经根。将除去神经节外膜的背根神经节移入含有0.25%胰蛋白酶的离心管内37°C水浴屮消化,20〜30min后加入含血清的培养液，以终止消化。用吸管吹打数次，使神经节组织块分散，用200n的尼龙网滤去细胞团块，将得到
7、的细胞悬液离心5min(l000r/min),弃上清液，在离心管内加入适量培养液，用吸管轻轻吹打,制成均匀的细胞悬液，取样计数后用培养液调整细胞浓度为3x105个细胞/卩1,种植在24孔(每孔加入1山细胞悬液)培养板内涂有多聚赖氨酸的圆盖片上，标上细胞名称、组号和接种H期等。将标本移入3TC、5%CO2培养箱内孵育。1.3细胞分组和处理上述培养的DRG神经元，于3TC、5%CO2及饱和湿度条件下培养48h后随机分组如下:①正常对照组：原代培养的DRG神经元培养48h,然后加入50pl无菌去离子双蒸水孵育12h,作为正常对照；②实验组：将原代培养的DR
8、G神经元培养48h,然后用100nmol/L浓度的树胶脂毒素孵育12ho1.4观察细胞形态24孔板培养的DR
