树胶脂毒素对人膀胱癌rt4细胞抑制作用的体外研究

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1、分类号UDCR737．14610八年制博士学位论文学校代码l堕三三密级公珏树胶脂毒素对人膀胱癌RT4细胞抑制作用的体外研究StudiesoninhibitoryeffectofresiniferatoxinonHumanBladderCarcinomaRT4cellsinvitro作者姓名：学科专业：研究方向：学院(系、所)：指导教师：王珂楠临床医学外科学湘雅二医院杨金瑞教授答辩委员会主席中南大学二。一三年五月，原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他

2、人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：星翊摘日期：翘f至年』月丑日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：豆面幽导师签

3、树胶脂毒素对人膀胱癌RT4细胞抑制作用的体外研究摘要：膀胱癌是泌尿外科最常见的恶性肿瘤之一，组织学类型主要为膀胱尿路上皮癌(urothelialcellcarcinoma，UCC)，又称移形细胞癌(transitionalcellcarcinoma，TCC)。大多数(70％-80％)膀胱癌病例为为非肌层浸润性膀胱癌fNor,一muscle—invasivebladdercancer,NMIBC)[1,21，手术治疗是目前NMIBC的首选的治疗方法，所有非肌层浸润性膀胱癌患者行TURBT术后均建议行膀胱腔内灌注化疗药物或免疫制剂，降低肿瘤复发率【3】。但由于膀胱

4、癌具有多发性原位癌不易通过膀胱镜检查发现等特点，TURBT术后行化疗药物灌注后，1年内的复发率仍高达15％．61％，而5年内更有3l％一78％患者出现肿瘤复发。目前常用的灌注化疗药物包括：吡柔比星、丝裂霉素C、表柔比星、阿霉素、羟喜树碱。但这些常见药物均会产生化学性膀胱炎等副作用，并在TURBT术后即刻灌注化疗后更明显。卡介苗(BCG)是已知预防复发和进展最有效的灌注药物，但行BCG灌注治疗后，肿瘤复发率仍有30％．45％，大量患者出现严重膀胱刺激征，并有部分患者出现反应性前列腺炎、附睾炎、肝炎等严重副反应，无法耐受治疗，致其临床应用受到很大限制【4】。为了寻

5、找疗效更好、副作用更小的膀胱癌化疗药物，国内外学者都在进行不懈的努力。近年来，香草酸受体1(vanilloidreceptor1,VRl)作为新的抗肿瘤药物的靶点进入了人们的视线。VRl是瞬时感受器电位亚家族成员之一，是一种非选择性的阳离子通道，广泛表达在初级传入感觉神经元及粘膜组织中，在多种恶性肿瘤组织中也有表达。使用香草酸类药物如树胶脂毒素(resiniferatoxin)、辣椒素(capsaisin)等，可以激活VRl通道，引起强烈的钙离子内流，引起细胞内钙超载导致明显的细胞毒作用，研究证明了这II种钙超载可以激活线粒体凋亡途径诱导的肿瘤细胞凋亡。树胶脂

6、毒素(resiniferatoxin，I㈣)是一种从大戟类树胶植物的乳汁中分离出的刺激性香草酸类分子，对VRl的激动活性大大强于辣椒素，因此又被称为辣椒素类似物、超强辣素，是已知最强的VRl激动剂，可以诱发更强、持续时间更长的钙离子内流。已经在临床研究中应用于膀胱灌注治疗我科间质性膀胱炎及神经源性膀胱等疾病，无明显不良反应。在抗肿瘤领域，国外学者研究了树胶脂毒素对皮肤鳞状细胞癌细胞及胰腺癌细胞的体外抑制作用，并对作用机制进行了研究。而对膀胱癌细胞树胶脂毒素是否具有抗肿瘤活性，是否可以作为新的膀胱灌注化疗药物是我们感兴趣的地方。本研究应用了MTT、流式细胞术、倒

7、置显微镜研究了树胶脂毒素对人膀胱癌RT4细胞的增殖的抑制作用、对细胞周期的阻滞作用、对细胞凋亡的诱导作用以及对RT4细胞形态学的影响。又应用荧光钙离子成像技术、Western．blot技术初步探讨了树胶脂毒素对RT4细胞抑制作用的分子生物学机制。Ill第一章RTX对人膀咣癌RT4细胞生物学行为的影响实验目的：研究RTX干预对膀胱癌RT4细胞增殖、细胞周期、细胞凋亡的影响。实验方法：1．采用MTT法以0nmol／LRTX作为阴性对照组，观察不同浓度(50，100，200，500，1000，1500nmol／L)RTX作用不同时间(24h，48h，72h)对RT4

8、细胞增殖的抑制作用。2．采用倒置相差显