树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响论文

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1、树胶脂毒素对体外培养的背根神经节神经元的影响论文于振海孙毅张璐萍阚氏海刘蛟黄飞【摘要】目的观察树胶脂毒素对体外培养大鼠脊神经背根神经节神经元的影响。方法对TT比色法和细胞形态学分析法，观察树胶脂毒素对神经元存活及形态的影响。结果背根神经节神经元存活率降低，神经元呈簇状聚集明显，细胞轮廓增强，胞体缩小，突起断裂或变短甚至消失。结论100nmol/L浓度的树胶脂毒素对背根神经节神经元有损伤作用。【关键词】树胶脂毒素；背根神经节；神经元【Abstract】ObjectiveToobservetheinf

2、luenceofresiniferatoxinonthedorsalrootganglionofrat.MethodsThedorsalrootganglioncellculturemodelol/L.freelethodofMTTandobservedthecell’smorphologicchange.ResultsTheresiniferatoxinreducethesurvivalofthecell.Cellgatheredobviously,cellbodybecamesmaller,c

3、ellprocessesfaultedorshortenedorevendisappeared.ConclusionThedensityofthe100nmol/Lresiniferatoxincandamagethedorsalrootganglioncells.【Keyptom，LUTS）。近年来辣椒辣素的类似物树胶脂毒素(resiniferatoxin，RTX)由于疗效好、副作用轻，逐渐取代了辣椒辣素。RTX是从大戟色素体树脂中提炼出来的一种超强的，具有与辣椒辣素相似的生物学活性的物质，其通

4、过与初级传入神经元上的辣椒素受体(vanilloidreceptor1,VR1)结合，引起膀胱传入纤维脱敏，从而减少感觉纤维的传入，发挥其对下尿路症状的治疗作用。虽然RTX在膀胱灌注治疗下尿路症状的临床应用中没有发现致癌或促进肿瘤生长作用，但是其远期安全性仍然是未知的。临床最关心的是RTX对膀胱的传入神经是否有损伤，传入神经的胞体位于脊髓背根神经节。为此，本研究利用体外建立胎鼠背根神经节神经元培养模型，采用临床膀胱灌注浓度的RTX对培养的背根神经节神经元进行处理，观察在此浓度下背根神经节神经元的存

5、活率及形态学改变，从而探讨其对背根神经节神经元的影响，为临床应用RTX膀胱灌注治疗下尿路症状的用药安全性提供一定的理论及实验依据。1材料与方法1.1试剂和仪器DMEM/F12培养基,胎牛血清均购自GIBCO公司,树胶脂毒素（resiniferatoxin，RTX）购自美国LKT公司，MTT、多聚赖氨酸购自Sigma公司，OlympusCKX41型倒置相差生物显微镜由滨州医学院形态学实验室提供。1.2DRG(背根神经节)神经元的培养在无菌条件下,取胚龄为15d胎鼠30只,在解剖显微镜下取每只胎鼠的

6、背根神经节,每只胎鼠可得到30个左右的背根神经节。在解剖显微镜下,用显微外科镊子和手术刀移去神经节外膜和神经根。将除去神经节外膜的背根神经节移入含有0.25%胰蛋白酶的离心管内37℃水浴中消化,.freelin后加入含血清的培养液，以终止消化。用吸管吹打数次,使神经节组织块分散,用200目的尼龙网滤去细胞团块,将得到的细胞悬液离心5min(1000r/min),弃上清液,在离心管内加入适量培养液,用吸管轻轻吹打,制成均匀的细胞悬液,取样计数后用培养液调整细胞浓度为3×105个细胞/μl，种植在24

7、孔（每孔加入1μl细胞悬液）培养板内涂有多聚赖氨酸的圆盖片上，标上细胞名称、组号和接种日期等。将标本移入37℃、5%CO2培养箱内孵育。1.3细胞分组和处理上述培养的DRG神经元,于37℃、5%CO2及饱和湿度条件下培养48h后随机分组如下:①正常对照组：原代培养的DRG神经元培养48h，然后加入50μl无菌去离子双蒸水孵育12h，作为正常对照；②实验组:将原代培养的DRG神经元培养48h，然后用100nmol/L浓度的树胶脂毒素孵育12h。1.4观察细胞形态24孔板培养的DRG神经元,于培养后4

8、8h及随机分组、RTX处理12h后，置倒置显微镜下观察细胞形态,并取视野中细胞较明显处照相。1.5MTT法检测细胞的存活率25mgMTT溶于pH7.4PBS液5ml中，过滤除菌。将各组神经元以每孔100μl传于96孔培养板。在终止培养前4h，各组分别加入20μl5mg/ml的MTT溶液。吸弃培养液，各孔加入100μlDMSO，将培养板振荡10～20min。将培养板放在酶联仪上，采用实验波长570nm，参考波长630nm，测定光密度（OD值），各组OD值取均值后，以下列公式计算存活细