杨梅黄酮对人膀胱癌t24细胞的体外作用与体内实验研究

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1、浙江人学硕．J：学位论文中文摘要杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞的体外作用及体内实验研究浙江大学医学院免疫学硕士研究生孙芳导师陈玮琳副教授中文摘要第一部分杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞增殖的影响目的研究杨梅黄酮(Myricetin)在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞增殖和细胞周期的影响以及其可能的机制。方法用MTT法观察不同浓度的杨梅素(0，10，20，40，60，80，100gM)作用不同时间(12，24，36，和48h)后对T24．-细胞增殖的影响。收集不同浓度Myricetin(0，20，40，80gM)作用24h的T24细胞，碘化丙锭(PI)染色后经流式细胞仪检测，并对

2、获取数据进行细胞周期分析。应)-罚Westernblotting方法检测参与调节细胞周期的相关蛋白CyclinB1和CDC2I均表达，以探讨相关作用机制。结果1．Myricetinfl皂显著抑制T24细胞增殖，并随药物浓度升高(10．80gM)和作用时间的延长(12．48h)而抑制作用增强，呈明显剂量和时间依赖性。2．经流式细胞仪检测，不同浓度Myricetin(0，20，40，809M)作用24hl'吏T24细胞在G2／M期细胞显著增多，出现G2／M期阻滞，呈剂量依赖性。3．Myricetin(0，20，40，809M)作用48h后，随着作用浓度的增加，T24：细胞C

3、yclinB1和cdc2的表达逐渐降低，呈剂量依赖性。结论Myricetinfl旨,显著抑@]T24细胞的增殖，其抑制作用呈时间和剂量依赖性。II浙江人学硕lj学位论文中文摘要Myricetin可抑制T24．细胞CyclinB1和CDC2的表达，其可能是诱导T24细胞G2／M期阻滞的分子机制之一。第二部分杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞凋亡的影响目的研究Myricetin在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞凋亡的诱导作用，并探讨其诱导凋亡的可能的分子机制。方法研究Myricetin对T24细胞增殖的抑制作用是否为诱导细胞凋亡的结果。用光学显微镜及荧光染色观察Myricetin作

4、用后的T24细胞的凋亡形态学改变。采用流式细胞仪(PI和annexinV双染法)检测细胞凋亡率的变化。采用Westernblotting方法检测不同浓度Myricetin(0，20，40，80gM)作用24h和48h后T24细胞中caspase．3，PARP,Bcl．2家族等相关凋亡蛋白表达的变化。结果1．不同浓度Myricetin(0，20，40，809M)作用于T24细胞24h后能明显诱导细胞凋亡，凋亡的诱导作用呈剂量依赖性。2．光学显微镜下观察显示不同浓度Myricetin(0，20，40，80gM)作用于T24细胞24h后使细胞密度呈剂量依赖性降低。同时观察到凋

5、亡细胞所具有的典型形态学改变。3．通过流式细胞仪(PI和annexinV双染法)检测发现Myricetin作用于T24细胞24h后细胞凋亡呈剂量依赖性增加。4．Myricetin(0，20，40，80lxM)作用24h后，T24细胞中caspase．3和PAI冲均未被激活。5．Myricetin(0，20，40，80lxM)作用48h后，随着作用浓度的增加，T24细胞中Bax表达逐渐增高，Bcl．2的表达逐渐降低，呈剂量依赖性。结论Myficetin能诱导T24细胞凋亡，凋亡的诱导作用呈显著的剂量依赖性。Myricetin能调节T24细胞中Bcl．2家族蛋白的表达，其可

6、能是诱导T24细胞凋亡的分子机制之一。Ill浙江人学硕I：学位论文中义摘要第三部分杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞侵袭转移的影响目的研究Myricetin在体外对人膀胱癌细胞系T24细胞侵袭转移能力的影响及其可能机制。方法划痕愈合实验检测Myricetin对T24细胞迁移能力的影响，Transwell小室进行人工重组基底膜侵袭实验检测Myficetin对T24细胞侵袭能力的影响。采用RT-PCR方法检测Myricetin(0，20，40，80gM)作用24h后的T24细胞中MMP．9mRNA和MMP．2mRNA的表达。结果1．Myricetin(0，20，40，809M)作

7、用不同时间(0，6，12和24h)后，T24细胞的迁移能力逐渐降低，呈剂量和时间依赖性。2．体外的侵袭实验显示Myricetin(0，20，409M)作用24h后，T24细胞侵袭能力显著降低。3．Myricetin(0，20，40，809M)作用24h后，随着作用浓度的增加，T24细胞的MMP．9mRNA表达降低。结论Myricetin能显著抑制T24细胞的迁移，侵袭能力。Myricetin这种侵袭转移抑制能力可能与降低MMP．9的表达有关。IV浙江人学硕．Ij学位论文中文摘要第四部分杨梅黄酮对人膀胱癌T24细胞体内实验的研究目的研究My