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1、以竹粉为基质固态培养虫拟蜡菌及其产漆酶条件研究摘要：该研究探讨了不同培养条件对CeriporiopsissubvermisporaNL-4固态发酵产漆酶的影响。结果表明，当培养温度为30°C、培养基的初始含水率为64%、接种量为12%、起始pH6.0时，该菌株活力最好且漆酶产量高；在条件下培养10d,漆酶活力可达12.45U/g干基，比优化前提高了40%。关键词：虫拟蜡菌；固态发酵；漆酶中图分类号TQ925文献标识码A文章编号1007-7731(2017)08-0018-03Abstract：Effectofcultureconditionsfortheproductionofl
2、accasebyCeriporiopsissubvermisporaNL-4wereinvestigatedinsolid-statefermentationusingthemilledbambooasmainsubstrate.Theresultsofsingle-fhctortestshowedthattheoptimalcultureconditionsofthetemperature,moistureofmedium,inoulumvolumeandtheinitialpHwere30°C,64%,12%and6.0.AfterthestrainofC.subvermis
3、poraNL-4wasculturedforlOdgrowthundertheconditionsoftheaboveparameters,thelaccaseactivitywasupto12.45U/gdrymedium,whichwas40%higherthanthatundertheprimitiveconditions.Keywords：Ceriporiopsissubvermispor；Solid-fcnncntation；Laccase漆酶(laccase,p-diphenoloxidase,E.C.l.10.3.2)最初是□钠峻髦谢竦玫模厂随着生物技术的发展，微生
4、物源漆酶有了较大的发展。由于漆酶在多个领域具有广泛的用途，对漆酶的需求II益增多［1-2］0但目前微生物产漆酶的产量仍不高［3］,培养期过长导致染菌的可能性增大；漆酶的产量过低严重制约了其分离提取和纯化［4］。采用农林生物质资源作为主要基质，通过固态培养的方式探索漆酶的产生及其产量的提高，不但可以有效节约资源，降低生产成本，减少污染物的扌非放［5］；同时，与液体发酵相比，固态发酵更接近于白然界的生态坏境，有利丁•菌株产酶［6-7］o虫拟蜡菌(Ceriporiopsissubvermispor)［8］是一类高产漆酶的白腐菌，木研究室对其进行了菌株的诱变，获得了一株漆酶产量明显提高的
5、菌株C.subvermisporaNL-4［9］O因此，木研究以CeriporiopsissubvermisporaNL-4为发酵菌株，以竹粉为主要基质，对该菌固态发酵产漆酶的条件进行优化，以提高漆酶产量和产酶效率［10］。1材料与方法1.1菌株C.subvermisporaNL-4,木研究室诱变选育获得。1.2竹粉竹粉,为毛竹(Phyllostachyspubescens)的加工剩余物,产自浙江临安,烘干后过40目筛，干燥贮存备用。1.3试剂匍萄糖等均为国产分析纯，购白杭州木木生物科技有限公司；ABTS,购于sigma公司；马铃薯等购于临安浙皖农贸城。1.4培养基(l)PDA固
6、体培养基(w/w)：马铃薯20%,葡萄糖2%,琼脂2%,KH2PO40.3%,MgSO4・7H2O0.15%,12TC灭菌20min［10］o(2)液体种了培养基(w/w)：酵母膏0.3%,葡萄糖2%,蛋白月东0.5%,pH
7、z
8、然，121"C灭菌20min［10］o(3)
9、司态发酵基础培养基：在250mL三角瓶屮装竹粉30g,含水率60%,121°C灭菌20min［10］o1.5固态发酵参照王超等固态培养方法［10］o1.6生化参数的测定(1)粗酶液制备及酶活测定：参照高恩丽等方法并改进［11］。参照黄丹莲等方法并改进［12］。(2)生物最的测定：川氮基徜糖法，参照彭丹方法测定
10、［13］。2结果与分析2」C.subvermisporaNL-4生长曲线和产酶曲线将液体种子以10%接种量接入固体发酵基础培养基屮，180r/min、28°C培养16d,漆酶产量和生物量如图1。由图1屮菌体的生长曲线显示，在前4d之内，菌体生长较慢，Z后在4〜8dZ内菌体干重增加较快，呈现出对数生长期，8〜lid后保持基木稳定[10]。酶活
11、11
12、线显示，C.subvermisporaNL-4在固态发酵条件下，第5d才开始产酶，第12d漆酶活力达到最高，因此初步确定12d为后续发
