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《壳聚糖酶生产菌的筛选、鉴定及其产酶培养条件的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。
1、第30卷第4期工业微生物Vol二No.42000年12)」IndustrialMicrobiologyL入X:.2000壳聚糖酶生产菌的筛选、鉴定及其产酶培养条件的研究王钦宏，蔡静平(郑州粮食学院，河南450052)摘要从土样中分离到60株分泌胞外壳聚糖酶的菌株，经过筛选，其中有1株细菌产酶能力较高。生理生化试验鉴定该细菌为假单胞菌(Pseudomonassp.)。对假单胞菌产酶的培养条件研究结果表明:最适培养基组分为(9几):壳聚糖5,氛基葡萄糖2,峭酸氨2,MgSO4.7玫O0.5,K姚P040.4,KCL0.5,FeS04.7姚00.01，起始pH6
2、.5;适宜培养条件是:接种量2.0X1护个/50m1培养液，28t,120r/min振荡培养3d.关键词:假单胞菌;壳聚糖;壳聚糖酶壳聚糖是氨基葡萄糖残基通过一1,4一糖酶的理化性质，作用机理，纯化方法等方面有昔键线性连接而成的长链分子，它天然存在了许多报道。另外在一些植物中也发现存在于接合菌、半知菌，如Agaricus,PUCCinia,有壳聚糖酶〔’〕。国内曾报道了球抱白僵菌Fusariun;等真菌的细胞壁中[il，也可由来产酶和降解壳聚糖的研究〔川。本文报导壳源广泛的几丁质通过部分或完全脱乙酞化制聚糖酶生产菌的分离、筛选、鉴定和产酶菌假得。壳聚糖经壳
3、聚糖酶(EC3.2.1.99)水龟胞菌V111T39的产酶条件研究。解[21，可产生壳低聚糖或氨基葡萄糖。1材料和方法近年来的研究发现，壳低聚糖具有抗细菌、真菌，调节机体免疫及抗癌等功能〔3-611.1土样属功能性低聚糖。虽然壳聚糖可被酸水解，从山东、浙江等地采集供菌种分离。但酸水解壳聚糖制备壳低聚糖存在成本高、L2培养基反应条件难控制及不易得到较高聚合度的低1.2.1分离平板培养基(g几)聚糖等缺点，因而酶法生产壳低聚糖受到广壳聚糖10，M9SO4.7姚00.5，K玩P04泛的关注。0.5,KCl0.5,FeSO4.7玫00.01，琼脂20,1972年M
4、onaghan等人[2〕首次报道发现pH6.5一7.0.壳聚糖酶(chitosanase)，经过20多年的一系1.2.2菌种筛选摇瓶培养液(g几)列的研究，已经在许多微生物中发现有壳聚壳聚糖10,MgSO4·7H200.5,KH2PO4糖酶存在，包括细菌、放线菌和真菌等〔7一’“]。0.5，KCl0.5,FeSO4-7HZ00.01，pH6.50其中对细菌Bacillu，属和放线菌Strepto-1.2.3菌种抖面培养基PDA。myces属的许多菌株已经作了较多的研究，在1.3壳聚糖作者简介:王钦宏(1974一)，男，现为中科院微生物研究所市售食品级壳聚糖
5、，脱乙酞度90%左博士生。右。第4期王钦宏，等.壳聚糖酶生产菌的筛选、鉴定及其产酶培养条件的研究第30卷1。4产酶菌的分离平板筛选法。结果。1。5菌体浓度测定表2菌株VIIIT39生理生化试验结果在655nm下测菌悬液的吸光值(平板测定项目结果测定项目结果菌落计数法校正)。氧化酶过氧化氢酶M.R.试验葡萄糖氧化1.6pH值测定用精密pH试纸或酸度计V.P.试验果聚糖产生测定。水解淀粉硝酸盐还原1.7培养液活菌数测定平板菌落计数法。水解果胶产生叫噪产氨试验硫化氢产生1.8壳聚糖酶活力测定脉酶测定脓青素检出参照YasushiU.E4)的方法，一个酶活力明胶水解
6、氨基酸脱梭酶单位(U)被定义为在37℃下每分钟催化生成色素产生精氨酸双水解酶蔗糖利用GIcNb相当于1mol氨基葡萄糖的还原糖所需的酶乳糖利用CMCc量。甘露醇利用乙酸1.9菌种的鉴定肌醇利用甘油果糖利用NH,CI根据文献〔12〕的方法，将分离筛选到的木糖利用KN03产壳聚糖酶菌株(细菌)进行形态观察和生鼠李糖利用NI-LN03理生化试验分类鉴定，以确定其归属。半乳糖利用(NK)?SO4壳聚糖利用NH=眺P0,2结果与分析山梨醉利用生长温度15--45℃柠檬酸利用生长初始「)H值3.5一8.52.1菌种的平板分离筛选“+”阳性，“一”阴性从采集到的13份土
7、壤样品中，通过平板。:可溶性荧光色素，b:Glciv:氨基葡萄糖，c:cMc:分离初筛和摇瓶培养复筛，共筛选到60株产梭甲基纤维素酶菌，其中大部分是霉菌，少数是酵母菌和细2.3.3鉴定结果菌。经酶活力检测比较，有一株VIIIT39的根据表1和表2的菌株形态特征和生理生化特征，该菌株与《伯杰细菌鉴定手册》(第产酶能力较强，选择其作为进一步研究的产酶试验菌。八版)上假单抱菌属(Pseudomonasmigula)的分类学特征最相符，所以判定菌株VII-2.2产酶细菌的鉴定rf39为假单抱菌(Pseudomonassp.2.2.1菌株形态特征通过菌体的染色制片及
8、活菌形态观察，V1117,39)。2.3培养时间对产酶的影响得到如
