细胞培养的设备和操作技术.ppt

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1、细胞培养的设备和操作技术第二章主讲内容实验室的设计和基本操作技术培养基及其配制第一部分实验室的设计细胞工程实验室它必须满足三个基本的需要，即：实验准备（培养基配制，洗涤与灭菌）；无菌操作；控制培养。从总体上来分，实验室主要分为两类：基本实验室：辅助实验室：实验室设计1、基本实验室：准备室接种室培养室作用植物细胞和组织培养所需器具的洗涤、干燥和保存；培养基的配制、分装和灭菌；化学试剂的配制；重蒸馏水的生产等。设计要求面积20m2左右。通风透光，地面防滑，墙面防潮。准备室▲实验台架▲大

2、、小水槽▲烘箱▲冰箱▲天平系列▲pH计▲高压消毒锅▲各种玻璃器皿▲药品柜▲（磁力）搅拌器▲电炉▲蒸馏水器设备其中：玻璃器皿包括三角瓶、试管、培养瓶、培养皿、烧杯、量筒、移液管等移液枪（根据条件需要）由枪和枪头组成其他：锅、微波炉等磁力搅拌器电子天平万分之一百分之一pH计微量移液器蒸馏水器接种室——也叫无菌操作室无菌操作室并非无菌，但应该保持清洁作用供外植体的接种，培养物的转移和原生质体的游离培养操作之用。设计要求墙壁光滑平整，地面平坦无缝，除出入口和通气口外，应当密闭，空气不能对流，或者空气经净

3、化后进入室内。无菌室旁边应设有缓冲间，缓冲间内应有紫外灯，随时可进行灭菌。无菌室内的日常灭菌：定期用甲醛和高锰酸钾混合后熏蒸，产生大量蒸汽，杀灭微生物。使用前处理：用新洁尔灭（1：50）擦净，然后用紫外灯照射灭菌至少20分钟，操作前用70%酒精喷雾。思考：紫外灯如何杀菌？操作中要注意什么？设备△紫外光灯△空调△放物架（或医用小平车：推送、放置培养基用；）△无菌操作用的器具：酒精灯、70%酒精消毒棉、解剖刀、弓背镊子、解剖针、剪刀等。△超净工作台：内设紫外灯、吹风装置、过滤装置等每次实验前要用紫外灯灭

4、菌20分钟以上，然后喷酒精灭菌，工作过程中注意一直开着吹风机，并且一定要关掉紫外灯，过滤网应经常清洗。其它部件：△离心机：分离原生质体用；△点融合仪：细胞融合用。离体组织和试管苗生长发育的场所，应为培养物创造适宜的温、光、气等条件。设计要求培养室内要求内壁保温、光滑、室顶高2.6m左右，易于控制温、湿度，窗上要求装双层密封玻璃窗，室内有足够电源。作用设备△空调机：冷暖型△加热器△定时装置：控制光照时间△培养架：放置培养瓶△摇床和转床：悬浮培养△各种光质灯管：光照培养△温度计：控制温度△遮光帘：供

5、暗培养之用2、辅助实验室：细胞学实验室摄影室及暗室生化分析室细胞学实验室主要设备各种显微镜，显微照相设备，切片、制片仪器设备，染色用具，暗房设备等。作用植物组织和细胞培养过程中，需随时观察记录其细胞学和形态解剖学的变化，故要设置细胞显微观察室。细胞工程实验室基本设备配制小结基本设备：冰箱、天平、酸度计灭菌设备：蒸汽压力灭菌锅、干热消毒柜、过滤灭菌装置、喷雾消毒器、紫外灯。无菌操作设备：净化工作台、接种箱光温控制设备：时间程序控制器、空调及温度感应器。细胞培养设备：培养设备根据需要而

6、定，包括培养架、培养箱、摇床、生物反应器等。细胞学鉴定设备：光学研究显微镜、实体显微镜、倒置显微镜第二部分基本操作技术基本操作技术主要是围绕无菌操作技术展开的一系列操作技能，内容主要包括：一．洗涤技术二．灭菌、消毒技术三、接种技术一、洗涤技术、洗涤目的：去除杂物，降低带菌量、根据洗涤对象的不同，主要分为：器皿洗涤（包括玻璃、塑料、搪瓷、不锈钢器皿）培养材料洗涤（一）器皿洗涤根据洗涤对象的具体情况可分为以下三种：特殊洗涤微生物大量污染的洗涤常规洗涤常规洗涤△自来水洗去油渍、霉菌等脏物；△温肥皂

7、水中浸泡一定时间后用刷子刷净；△自来水冲洗干净，至瓶壁不挂水珠为止；△蒸馏水淋洗内外壁△将玻璃器皿倒置：晾干或烘干（50～75℃）△放入除尘柜中备用微生物大量污染的洗涤△微生物污染器皿加压灭菌后再洗涤特殊洗涤（如沾有蛋白质类物质或其它有机物时)△经过常规洗涤未过蒸馏水的器具，浸泡入洗液（铬酸洗涤液是用重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫酸(H2SO4)配制而成）中数分至数小时；△回收洗液，器具先用自来水洗净，蒸馏水淋洗，烘干（75℃）（二）、试验材料的清洗清洗目的：来自自然界的试验材料，包括来自土壤中的幼

8、茎、磷茎，滋生着各种微生物，尤其是细菌的芽孢和真菌的孢子，一旦与培养基接触，就会很快的繁殖起来，造成培养基和培养材料的污染。清洗方法：先用自来水冲洗5分钟，然后用中性洗涤剂清洗，注意勿损伤试验材料。再用自来水流水冲洗半小时，用于下一步的药剂灭菌。二、灭菌、消毒技术（一）关于有菌和无菌的概念有菌的范畴：凡是暴露在空气中的物体，至少其表面都是有菌的，如植物的表面、超净工作台的台面，未处理的工具和手等。高压高温处理（工具、器皿、培养基等）物理或化学处理；火烤后