细胞培养室的设置和相关设备.doc

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1、1）常规细胞培养室的设置和设施1.无菌操作室：1）由更衣间,缓冲问和操作问三部分组成2）更衣间：位于培养室最外部，用于更换洁净的衣帽鞋口罩。放置消毒的防护服、衣帽柜、鞋柜。3）缓冲间：位于更衣间与操作间之间，目的是为了保证操作间的无菌环境。放置电冰箱、液氮灌、消毒好的无菌物品等。4）操作间：位于内部，专用于无菌操作、细胞培养。放置净化工作台及二氧化碳培养箱，离心机，倒置显微镜等。房间要求：独立房间，按洁净厂房要求建造，并需要保持空气消毒和清洁无尘：1）紫外线灯一产生臭氧，并且室内温度及湿度均较高，不利于工作人员健康。2）空气过滤的恒温恒湿装置一一最好，空气洁净度级别如

2、下:洁净度级别尘粒最大允许数/立方米微生物最大允许数浮游菌/立方米沉降菌/皿100级350005110000级350,0002,0001003100000级3,500,00020,00050010300000级10,500,00060,000100015注：空气洁净度级别表：一般普通培养室常选用100000级的2.准备室：常设置在无菌操作室外部，主要进行培养液及有关培养用的液体等的制备。主要设置：离心机、水浴锅、定时钟表、普通天平及日常分析处理物3.洗刷消毒间：要和其他区域分开，最好独立一室，主要用于各种培养器皿的清洗、准备和消毒，常设置：烘箱、高压蒸汽消毒锅、去离子

3、水或者蒸馅水处理器、酸缸、水槽刷子等。二.常用的基本设备1.仪器：1）超净工作台一常用侧流式（垂直流）工作台，洁净度应达到100级。国内产品一般都可以达标。视场地大小选用一个较宽的或者多个较小的，如：北京嘉创博远生产的VC-S-10402）显微镜：倒置荧光显微镜，若有条件，尚可配置带有照相系统的高质量相差显微镜、解剖显微镜、录像系统或缩时电影拍摄装置等，以便随时观察、记录、摄影细胞生长情况。需国外较好产品，如：Olympus3）CO2培养箱：需国外产品，如：SANYO/三洋4）干燥箱：电热干燥箱升温较高，一般需达到160°C以上。国内产品可达标5）水纯化装置：产生去离

4、子水，可用三蒸水替代。国外产品如：M川Q6）冰箱：低温冰箱（-20°C）可选国内的、超低温冰箱（・70,80C,）需要国外产品7）液氮罐：国内产品可8）离心机：国内产品可，低速离心机即可，不需要低温冷冻。用于细胞沉降，高速不好。9）精密电子天平：国产即可，需达到精密度：分析天平的感量为O.lmg、0.01mg和0.001mgo10）消毒器：高压蒸汽消毒锅，国产11）滤器：用于过滤培养基，国产进口都可1.常用的培养器皿：1）培养瓶：由玻璃或型料制成。主要用于培养、繁殖细胞。进行培养时培养瓶瓶口加盖螺旋瓶盖或胶塞，胶塞多用于密封培养。国产培养瓶的规格以容量（ml）表示，如

5、250ml、100ml、25ml等;进口培养瓶则多以底面积（cm2）表示。2）培养皿：由玻璃或塑料制成，供盛取、分离、处理组织或做细胞毒性、集落形成、单细胞分离、同位素掺入、细胞繁殖等实验使用。常用的培养皿规格有10cm、9cm、6cm、3.5cm等。3）多孔培养板：为塑料制品。可供细胞克隆及细咆毒性等各种检测实验使用。其优点是节约样本及试剂，可同时测试大量样本，易于进行无菌操作。培养板分为各种规格，常用的规格有：96孔、24孔、12孔、6孔、4孔等。4）培养操作有关的器皿：a）贮液瓶：主要用于存放或配制各种培养用液体如培养液、血清及试剂等。贮液瓶分为各种不同规格,如

6、1000ml.500ml>250ml、100ml、50ml、5ml等。b）吸管：主要分为刻度吸管、无刻度吸管。刻度吸管主要用于吸取、转移液体，常用的有1ml、2ml、5ml、10ml等规格。无刻度吸管分为直头吸管及弯头吸管,除可以作吸取、转移液体外，弯头尖吸管还常用于吹打、混匀及传代细胞。c）加样器（移液器）：用于吸取、移动液体或滴加样本。可根据需要调节量的大小,吸量准确、方便。尤以微量加样器，可保证实验样品（或试剂）含量精确，重复性良好。目前，可高温消毒的，多通道的各类移液器可供使用者选择，能确保加样准确、快速、方便并且达到无菌要求。d）其他用品：尚有收集细胞用的离

7、心管，放置试剂或临时插置吸管用的试管，装放吸管以便消毒的玻璃或不锈钢容器，用于存放小件培养物品便于高压消毒的铝制饭盒或贮槽,套于吸管顶部的橡胶吸头,封闭各种瓶、管的胶塞、盖子、冻存细胞用的安甑或冻存管、不同规格的注射器、烧杯和量筒以及漏斗，超净工作台使用的酒精灯，供实验人员操作前清洁消毒手使用的盛有酒精或其他消毒液的微型喷壶等。