细胞培养的生长条件和细胞培养室.ppt

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1、课程回顾和思考上皮型细胞扁平，形态较为规整，细胞大致呈多角形，胞体近中央处有扁圆的细胞核；细胞之间相互衔接或呈镶嵌状紧密排列；当细胞紧密排列时,细胞可为六角形或多角形，因为相互拥挤而呈现“铺路石样”，局部可构成单层的上皮样“膜片组织”成纤维型细胞细胞呈梭形、长条形、多角形或不规则形，后两种情况下常具宽扁胞质突起(片状伪足)；胞质近中央处有椭圆形胞核，胞体一般铺展很开。多数情况下，细胞之间排列疏松，有较大细胞间隙。有时也见相互平行排列，成群细胞呈现放射状、漩涡状等走行形式游走型细胞细胞相互分,一般不形成群落；

2、细胞内易出现色暗的吞噬性颗粒，常具有胞质突起(伪足)。这类细胞在培养器皿壁上生长的位置不固定，经常处于较活跃的变形及游走状态，因此外形不规则且不断变化。多形型细胞多形型细胞是一些形态上不规则的细胞，但它不像成纤维细胞型的细胞那样，不规则形态由宽扁的胞质突起所致。其细胞一般分胞体和胞突两部分。胞突为细长形，似丝状伪足。胞体虽略呈多角形，但没有成纤维细胞型那样不规则。体外培养细胞的整个生命活动过程分期每一代细胞的生长过程分期第四讲动物细胞体外培养的生长条件和培养设备一、所需营养营养条件是细胞体外生长的基本条件

3、。在培养液中，除了细胞生命活动所需的各种营养物质之外，还必须提供调节细胞生长与功能活动的激素、生长因子以及生长基质成分等。1、氨基酸蛋白质合成的原料12种必须氨基酸谷氨酰胺（每种细胞都需要）作用：（1）促进氨基酸进入细胞膜；（2）为嘌呤和嘧啶提供氮来源；（3）合成三、二、一磷酸腺苷所必需原料注意：-20℃保存谷氨酰胺，4℃2周就会失效2、碳水化合物能量来源六碳糖（葡萄糖、果糖、半乳糖、甘露糖、山梨糖）葡萄糖最适合细胞吸收半乳糖最难被细胞吸收3、无机盐Na+、Mg2+、Ca2+、Cl-、SO42-、PO43-

4、、HCO3等无机离子作用：1、维持细胞渗透压；2、调节细胞膜功能；3、是合成维生素、激素和酶的原料4、维生素细胞生长必不可少大多做为辅酶、辅基分为脂溶性和水溶性两种脂溶：A、D、E、K水溶：B族和C族（精米精面与五谷杂粮）血清能提供维生素，但是还需再添加一些其他维生素5、促生长因子和激素传递各种信息调节细胞代谢保持细胞状态促进细胞增殖来源：血清培养基中基本都会添加5%--20%的小牛血清6、其他成分微量元素：铁、锌、硒；铜、锰、钒现有的文献并没有明确规定要加入，或许加入的非限定物血清中含有。促细胞贴附物质：

5、对悬浮型细胞无效并非必需但有促进作用一些其他物质：丙酮酸钠2-巯基乙醇2-巯基乙醇（2-Me）：含巯基，能将含S化合物还原成谷胱甘肽诱导细胞增殖避免过氧化物损害细胞介导DNA合成2-Me谷胱甘肽抗氧化剂和自由基清除剂，还能调节其他氧化剂；谷氨酸、半胱氨酸、甘氨酸三者结合而成；解毒：能和芥子气、铅、汞、砷等重金属盐络合，达到整合解毒二、培养细胞的生存环境（一）、温度1.生理温度范围温度能够影响体内细胞代谢活动。在生理温度范围内，温度越高，酶活性越高,细胞代谢越快。大多数动物细胞在25～35℃范围内都仍然能够生

6、存和生长。若将培养细胞放在4℃下，数小时后再放回37℃,细胞仍然能够继续生长。体外培养动物细胞最常用的温度是37℃。培养的细胞总的来说对较低温度的耐受能力比较高温度(一般不超过39℃)的强。高于生理温度阈值时，温度越高，对细胞损伤越大。培养的细胞处在39～40℃下1h，即会受到一定的损伤，但仍然可以恢复；在41～42℃下lh，细胞便会受到严重损伤，绝大多数细胞将死亡；当培养温度高达43℃时，1h内将使得全部细胞死亡。高温对细胞造成的损伤程度与暴露的时间长短也有关。2.高温的影响(1)高温破坏了细胞内的酶(2

7、)高温能破坏细胞膜上的脂类(3)高温影响细胞分裂生物体耐受高温原因(1)酶的变化(2)与原先的生活环境温度有关(3)与脂类物质的熔点有关(4)营养状况3.低温的影响培养细胞对低温的耐受力较之对高温的耐受力要强。在生理温度范围内，温度越低，酶活性越低。当温度降至细胞所能忍受的最低限度时，细胞的生命活动即会受到抑制。低温条件能使细胞的核分裂时间延长。低温条件还能使细胞的代谢活动降低不同细胞能够忍受的低温阈值不同，能够忍受低温环境的时间长短不同。低温条件能造成一定的细胞死亡。（二）、气相环境对细胞生长的影响培养细

8、胞的气相环境尤其是Ｏ2和ＣＯ2对细胞生长也很有影响。Ｏ2参与细胞的能量代谢过程，而ＣＯ2对维持培养液的酸碱度很重要。体外培养的气相条件主要决定于培养物的类型、培养液的类型、培养系统(开放式或密闭式系统)以及需要的缓冲能力等因素。细胞培养与器官培养的气相环境差别较大。对于绝大多数开放式培养系统来讲，动物细胞培养的气相环境都是采用5%CO2与95%空气的混合气体。个别类细胞生长需要有别于此的气相条件。气相环境必须维持