构建动物细胞培养室和植物细胞培养实验室.doc

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1、细胞培养技术与其他一般实验室工作的主要区别在于要求保持无菌操作,避免微生物及其他有害因索的影响。目前，超净工作台的广泛使用，很大程度上方便了组织细胞培养工作，并使一些常规实验室有可能用于进行细胞培养。细胞培养实验室应能进行六方面的工作：无菌操作、孵育、制备、清洗、消毒灭菌处理、储藏。因此，无论是动物细胞培养室还是植物细胞培养实验室，必定有一下儿种房间。%1洗涤间：根据工作量的大小决定其大小。在实验室的一侧设置专用的洗涤水槽，用来清洗玻璃器皿。中央实验台还应配置水槽，用于清洗小型玻璃器皿。如果工作量大，可以购置一

2、台洗瓶机。准备洗液缸，专门用于洗涤对洁净度要求很高的玻璃器皿。此外还应配置落水架、干燥箱、柜子、超声波清洗器等。地面应耐湿并排水良好。%1培养基配制间：配备的主要仪器设备有：冰箱、天平、微波炉、pH计、培养基分装器、药品柜、器械柜、抽气泵、电炉、各种规格的培养瓶、培养皿、移液管、烧杯、量筒、容量瓶、储藏瓶等。%1消毒间：配备实验台、高压灭菌锅、排风灭火设备、细菌过滤设备、干热消毒柜、电炉等。灭菌锅的选择应根据不同的要求选择不同型号的灭菌锅。一般实验室可选用小型的医用手提式高压灭菌锅，较大的实验室可选用立式自动控

3、制压力和温度的灭菌锅。生产性的实验室可选用大型的卧式灭菌锅。如果没有条件的话，可以将上述工作间合并成一个准备间,要求是设备的安装和排列要合理、房间要宽敞、明亮、透风，地面要便于清洁、防滑。%1无菌操作室：无菌操作室主要用于实验材料的接种操作，所以又叫接种室。通常由里外两间组成，外间是缓冲间，用于准备工作，还有防止污染的作用。缓冲间的门应该与接种室的门错开，两个门也不要同时开启，以保证无菌室不因开门和人的进出带进杂菌。缓冲间内应该设有水槽、实验台、鞋帽架、和柜子、紫外灯。无菌操作室的内壁应当用塑钢板或瓷砖装修，工

4、作人员进入操作间前要穿上消过毒的工作服和拖鞋。室内应配有超净工作台，紫外灯、解剖镜、各种接种器械等。%1培养室。在实验室内，还会有以下常用的基本设备。I.仪器：（1）显微镜:倒置显微镜一一是组织细胞培养室所必需的日常工作常规使用设备之一，便于掌握细胞的生长情况并观察有无污染等。（2）培养箱：体外培养的细胞和体内细胞一样，需耍在恒定的温度下生存，大多数情况下，最适温度是37°C,温差变化一般不应超过±0.5°C,细胞在温度升高2C时，持续数小时即不能耐受，40°C以上将很快死仁因此需要有能控制温度的培养箱，如具有

5、较高灵敏度的恒温培养箱及C0?培养箱。（3）T-燥箱：用于细胞培养箱的有些器械、器皿需耍烘干后才能使用，玻璃器皿等须T热消毒。T热消毒时，电热T燥箱升温较高，一般需达到16O°C以上。通常使用鼓风式电热干燥箱。其优点是温度均匀、效果较好，缺点是升温过程较慢。升温时不能先升温后鼓风而应鼓风与升温同时开始，至ioo°c时，停止鼓风，应避免包裹器皿的纸或棉花烧焦，烧焦的碎屑可影响细胞的生长。消毒后，不能立即打开箱门以免骤冷而导致玻璃器皿损坏，应等候温度自然下降至ioo°c以下方可开门。（4）水纯化装置：细胞培养对水的

6、质量要求较高，细胞培养以及与细胞培养工作相关的液体的配制用水必须事先严格纯化处理。水纯化时可采用离子交换装置或蒸馆器。离子交换纯水尚不能有效去除有机物，因此用水时尚需再次蒸帼。进行细胞培养时配制各种培养液及试剂等均需使用三次蒸憎水：即使是用于玻璃器皿的冲洗，也应使用二次以上蒸馅水。（5）冰箱：细胞培养室必须配备。a.普通冰箱或冷藏柜——储存培养液、生理盐水、Hank，s液试剂等培养用的物品及短期保存组织标本。b.低温冰箱（-20°C）、超低温冰箱一一用于储存需要冷冻保存生物活性及较长时期存放的制剂，如酶、血清等

7、。——细胞培养室的冰箱应属专用，不得存放易挥发、易燃烧等对细胞有害的物质，且应保持清洁。（6）细胞冷冻储存器：储存器常用的是液氮容器。根据使用需要分为不同的类型及多种规格。选择购置液氮容器时要综合考虑容积大小，取放使用方便及液氮挥发量（经济）三种因素。液氮容器的大小可自25L〜500L,可以储存1ml的安甑250〜15000个左右。液氮温度可低达-196°C,使用时应防止冻伤。由于液氮不断挥发，应注意观察存留液氮情况，及时定期补充液氮，避免挥发过多而致细胞受损。（7）离心机：进行细胞培养时，常规需要进行制备细胞

8、悬液、调整细胞密度、洗涤、收集细胞等工作，通常需要使用离心机。a.一般可常规配置4000rpm的国产台式离心机，例如细胞沉降，使用80〜100g的离心机即可，离心力过大有时可能引起细胞的损伤。b.另外，可根据需要添置其他类型如大容量或可调节温度的离心机等。c.若需特殊用途，例如某些细胞的分离制备需梯度离心，则需另行配置实验所需的具备其他特殊功能的离心机。（8）天平：常用的有扭力天平、精