浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建.ppt

《浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建.ppt》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在行业资料-天天文库。

1、浅黄分枝杆菌简易基因组文库的构建浅黄分枝杆菌简介非结核分枝杆菌多存在于环境中；为条件致病菌。是指结核分枝杆菌、牛分枝杆菌与麻风分枝杆菌以外的分枝杆菌。其特性有别于结核分枝杆菌，如对酸、碱比较敏感；对常用的抗结核菌药物较耐受；抗原与结核分枝杆菌有交叉，常被误诊为结核杆菌，延误病情。浅黄分枝杆菌革兰氏阳性杆菌，直到稍弯曲，不运动。在生长的某些阶段耐酸性酒精，全部好氧生长缓慢或很缓慢。非结核分枝杆菌的一种，慢性条件性致病，病程长引发动物食欲下降、生产率下降，常误诊为结核，在人体内经常以某些免疫系统疾病的继发性感染出现。基因组文库简介基因组文库定义:把某种生物基因组的全部遗传信息通过克隆载体

2、贮存在一个受体菌克隆子群体中，这个群体即为这种生物的基因组文库。即某生物的基因组片段与适当的载体在体外通过重组后，转化宿主细胞，筛选后得到大量的阳性菌落，所有菌落的集合。基因组文库构建过程构建过程1234基因组DNA片段的制备载体的制备将基因组DNA片段连接入载体将重组载体转入宿主细胞论文实验路线分枝杆菌基因组提取载体的扩增与准备菌体基因组酶切阳性克隆筛选及文库评估DNA与载体连接与转化载体酶切制备浅黄分枝杆菌基因组的制备手动法提取浅黄分枝杆菌全基因组，并对基因组进行酶切，通过对酶切时间和酶切浓度的调整制备1-7kb大小的基因组片段。菌体核酸的提取与酶切基因组提取结果基因组酶切结果载

3、体的扩增与酶切通过小提质粒法得到一定量载体pUC18，并用Sau3AI的同尾酶BamHI进行切割，得到与菌体DNA片段切口相稳合的线性化pUC18载体。载体扩增与酶切12第一泳道为环状载体第二泳道为酶切载体基因组文库的构建将DNA片段与线性化载体用T4连接酶连接后，转化于大肠杆菌感受态细胞DH5ɑ，用蓝白斑法筛选阳性克隆，其中白色栗粒状菌活即为转化成功的阳性克隆转化及筛选转化阳性菌落的PCR检测用载体pUC18的通用引物对随机挑取的阳性白色菌落做菌落PCR，其得到的条带均位于2－7kb长短范围，证明目的片段已经成功插入受体细胞PCR检测DiagramThemeGalleryisaDe

4、signDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.ThemeGalleryisaDesignDigitalContent&ContentsmalldevelopedbyGuildDesignInc.TitleAddyourtextCycleDiagramAddYourTexthere菌体核酸的提取及AddYourTexthereCTitleAddYourTexthereBTitle基因组文库的容量鉴定公式：N=ln(1-P)/ln[1-(I/G)]N:一个完全基因文库所应包含的重组体克隆数p:所期望的目的基因在基因文库中

5、出现的几率I/G:插入片段的平均大小与基因组DNA大小的比值公式验证法经公式计算当克隆数达2629~18418个时，可99%以上涵盖菌体全基因组，本实验得阳性克隆约为4×104个，说明基因库容量足够涵盖浅黄分枝杆菌全基因组结论通过实验熟练掌握了分子生学核酸提取、酶切、连接等操作技能成功构建了浅黄分枝杆菌的基因组文库，为实验室对该菌的后续研究提供了基因的种质资源结论1结论2