GBT5009.171-2003保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定.pdf

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1、ICS67.040C53中华人民共和国国家标准GB/T5009.171-2003保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定Determinationoftheactionofsuperoxidedismutaseinhealthfoods2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部.*中国国家标准化管理委员会a,l.Gs/T5009.171-2003前言本标准由中华人民共和国卫生部提出并归口。本标准负责起草单位:吉林市卫生防疫站、吉林医学院。本标准第一法主要起草人:袁彦华、罗速、于敬伟、孙连军、赵凤明。本标准第二法

2、主要起草人:罗速、袁彦华、张吉林、卢忠魁。GB/T5009.171--2003引言超氧化自由基(〕艺可以造成机体细胞损伤超氧化歧化酶(SOD)能够清除机体内O;。食品中SOD活性的测定，国内外尚无标准检验法。因此，卫生部九五制标规划确定了食品中SOD活性测定的研究课题。本标准以修改的Marklund方法和化学发光法测定食品中SOD活性。前者SOD活性测定最低检出浓度为1.17U/mL，相当于1.1X10-smol/L，方法灵敏，仪器价廉，操作简单，易于推广;后者SOD活性测定最低检出浓度为0.033U/mL，相当于3.0X10-'0mol/

3、L，灵敏度比前者提高约二个数量级。具有更加灵敏、快速和干扰少等优点，但试剂较贵，可应用于仲裁或科研。两种测定方法对同一SOD酶测定结果无显著差异(P>0.05)oGB/T5009.171-2003保健食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定范围本标准规定了食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定方法。本标准适用于各类食品中超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定。本方法第一法检出限1.17U/mL;第二法检出限0.033U/mL.第一法修改的Marklund方法2定义25℃时抑制邻苯三酚自氧化速率50%时所需的SOD量为一个活力单位。3原理在碱性

4、条件下，邻苯三酚会发生自氧化，可根据SOD抑制邻苯三酚自氧化能力测定SOD活力。4试荆4.1A液:pH8.200.1mol/L三轻甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲溶液(内含1mmol/LEDTA"2Na).称取1.2114gTris和37.2mgEDTA·2Na溶于62.4mL0.1mol/l,盐酸溶液中，用蒸馏水定容至100mL.4.2B液:4.5mmol/I邻苯三酚盐酸溶液。称取邻苯三酚(A.R)56.7mg溶于少量10mmol/L盐酸溶液，并定容至100mL.4.310mmol/L盐酸溶液。4.40.200mg/mL超氧化歧化酶(S

5、OD).4.5蒸馏水:二重石英蒸馏水。5仪器5.1紫外一可见分光光度计。5.2精密酸度计，精确度。.OlpH.5.3离心机。5.410mL比色管。5.510mL离心管。5.6玻璃乳钵。6试样的制备6.1固体样品(茶、花粉等)称取1.00g样品置于玻璃乳钵中，加人9.0mL蒸馏水研磨5min，移人10mL离心管。用少量蒸馏水冲洗乳钵，洗涤并人离心管中，加蒸馏水至刻度，经4000r/min离心15min，取上清液测定。6.2澄清液体样品可取原液直接测定，浑浊液体样品经4000r/min离心15min，再取上清液测定。413GB/T5009.17

6、1-2003分析步骤7.1邻苯三酚自氧化速率测定在25℃左右，于10mL比色管中依次加人A液2.35mL,蒸馏水2.00mL,B液。.15mL。加人B液立即混合并倾人比色皿，分别测定在325nm波长条件下初始时和1min后吸光值，二者之差即邻苯三酚自氧化速率AA125(min-)。本试验确定△A125(min-')为0.060.7.2样液和SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率测定按7.1步骤分别加人一定量样液或酶液使抑制邻苯三酚自氧化速率约为1/2AA325(min-)，即‘1/325(min-)为0.030.SOD活性测定加样程序见表1,表1

7、SOD活性测定加样表试液空白{样液SOD液肠A液/mL2.352.350蒸馏水/mL1.801.80样液或SOD液/tLL20.020.0B液/mL0.150.15结果81结果计算8.1.1液体样品按式(1)计算:乙'1.,2:一△A'-)0%乙'122,SOD活力(U/mL)=X4.5X告XD...............⋯川50%式中:U/mL-SOD酶活力单位;△八二5—邻苯三酚自氧化速率;AA'-—样液或SOD酶液抑制邻苯三酚自氧化速率;V—所加酶液或样液体积，单位为毫升(mL);D-酶液或样液的稀释倍数;4.5—反应液总体积，单位

8、为毫升(mL).计算结果保留三位有效数字。2固体样品按式(2)计算:△A32:一△八，。25x100%DVI八9.,25X45X一X-SOD活力(U/a)V优(2)50式中:V—