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时间:2019-03-30
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1、菠萝超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定重庆师范大学生命科学学院生物科学2003级梁慧指导教师:许平摘要:本文采用硫酸铵分级沉淀,透析,DEAE-纤维素A-52离子交换柱层析从菠萝中分离纯化SOD并采用Folin-酚法测蛋白质含量,邻苯三酚自氧化法测定SOD酶活性,得到酶的比活力为326.47u/mg·pr,回收率为30.45%,提纯倍数18.40的SOD.同时得到了电泳纯一的SOD。并且分别研究了不同pH值、温度对菠萝SOD活性的影响。结果表明:菠萝中SOD的活力在20-60℃和pH7.8—8.6范围内稳定。
2、且在温度为25℃,pH为8.2的条件下活力最大。这一研究提供了从高等植物中提取SOD的有效方式。关键词:超氧化物歧化酶;菠萝;邻苯三酚自氧化;活性测定TheMeasurementofActivityofPineappleSODGrade2003BiologyScienceChongqingNormalUniversityLianghuiTutor:XupingAbstract:Inthepaper,Superoxidedismutases(SOD)frompineapplewaspurifiedbyacomb
3、inationofammoniumsulfatefractionation,dialysisandDEAE-celluloseA-52.Thepurifiedenzymewasahighlyhomogeneousproteinwiththespecifecactivityof326.47u/mg·pr.Theyieldrateisabout30.45%,andthemultiplicationisashighas18.40times.Theresultsshowedthattheenzymewasamanga
4、nesesuperoxide.AndwemeasuredtheenzymeindifferentpH,temperature.Theresultsshowedthat:theenzymaticactivityofpineappleisstablewithinthetemperature20—60℃andpH7.8—8.6.IntheconditionofT=25℃,pH=8.2isconfirmedtobethebest.ThisstudyprovidesaneffectiveapproachforSODre
5、searchonhigherplants.KeyWords:Superoxidedismutase;pineapple;pyrogallotautoxidation;activitymeasurement.超氧化物歧化酶(superoxidedismutase,简称SOD),是一类广泛存在于生物体内的金属酶,能够催化超氧阴离子自由基发生歧化反应,平衡机体内的氧自由基,SOD是一类重要的自由基清除剂,它催化超氧阴离子自由基O2.-与H+发生歧化反应,生成H2O2和02,反应式如下:过氧化氢在过氧化氢酶的作用下进
6、一步分解生成H2O和O2,消除O2.-等中间物的毒性。由于O2.-性质活泼,极具破坏作用,因而当机体内有过多O2.-第12页(共12页)积累时可诱发多种疾病。SOD作为体内自由基的有效清除剂,能使自由基的形成和消除处于动态的平衡,从而抵御O2.-的毒害作用[1]。因此,SOD已成为化学及生物化学研究领域中热门的研究课题。作为生物体内超氧阴离子自由基的清洁剂,SOD在防辐射、抗衰老、消炎、抑制肿瘤和癌症、自身免疫治疗等方面显示出独特的功能,在医学、食品、化妆品等领域得到越来越多的应用[2]。目前,世界各地学者对
7、SOD的研究方兴未艾,深入研究SOD不仅有着重大的理论意义,也有着重大的实际应用价值。已开发的SOD资源有动物血、刺梨、麦叶、果蔬及微生物等。目前,我国主要是从动物血液中提取,并已从牛血中成功地获得高纯度的Cu,Zn—SOD,国外药用S0D系从牛血中提取,但动物饲养容易受到饲料、疾病(如疯牛病)及饲养环境等因素的影响,而用植物原料提取SOD前景广阔。特别是近年来SOD功能果品系列产品开始流行,其是纯天然食品,没有任何副作用,无污染,无残毒。人们在食用美味果品的同时,又获得了当前最流行的保健食疗品。如SOD猕猴
8、桃,SOD草莓,SOD柑橘。对水果中SOD活性的测定已成为必要,而菠萝是深受人们喜爱的水果之一,对其SOD活性的测定具有一定的实际意义。资料表明[3],菠萝味甘、微酸,性微寒,有清热解暑、生津止渴、利小便的功效,可用于伤暑、身热烦渴、消化不良、小便不利、头昏眼花等症。而且在果汁中,还含有一种跟胃液相类似的酵素,可以分解蛋白,帮助消化。菠萝营养丰富,其成分包括糖类、蛋白质、脂肪、维生素A、B1、B2、
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