注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立【药学毕业论文，绝对】

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1、药学论文•注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立【摘要】目的：建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查方法。方法：按《中国药典》2005年版（二部）附录收载的细菌内毒素检查方法及指导原则进行实验。结果：注射用炎琥宁经1-40倍稀释后对蛍试剂无干扰作用。结论:细菌内毒素检测方法可用于注射用炎琥宁的热原检查。【关键词】细菌毒素蛍试剂炎琥宁注射用炎琥宁具有清热、解毒、抗炎的功能，临床应用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。临床用药广泛，乂常用于静脉滴注，现标准为进行热原检查〔1〕，由于细菌内毒素检查具有灵敏度高，操作简便，重现性好的优点。现将细菌内毒素法代替热原检查法。1仪器勻试剂ZH2

2、B2ENDER混匀器；DC3A型干式恒温器（南京三爱斯技术幵发有限公司）；无热原吸头，微量移液器。细菌内毒素工作品（CSE，效价70EU/支，批号20053，中国药品生物制品检定所）；蛍试剂（TAL，灵敏度0・125EU/ml，批号051109，050210，湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素检查用水（批号200050208，含量＜0.03EU/ml，湛江海洋生物制品检定厂）；注射用炎琥宁（供试品，规格每支0.2g，批号051209、0501018050926‘哈尔滨三联药业有限公司）。2方法与结果2.1賞试剂灵敏度(入)复核按细菌内毒素检查法〔2〕，用EET水将细

3、菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25入4个浓度进行实验。结果表明，灵敏度为0.125EU/ml的賞试剂符合规定。见表1。将表1数据代入公式入c二Sxini入c二0.125。表1賞试剂灵敏度复核实验结果TAL内毒素浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125灵敏度(Ac)051109++--0.125050210++--0.1252.2注射用炎琥宁细菌内毒素限値「(L)的确定L=K/M，式中K为规定的给药途径，人用每千克体重每lh可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K二5.0EU/kg・h；M为人用每千克体重每lh给药的最大剂量，经计算，供试品

4、M=1.0ml/kg-h，因此细菌内毒素理论限値为：L=K/M二5/1.0二5EU/ml。2・3供试品的最大有效稀释倍数(MVD)选用灵敏度为0・125EU/ml蛍试剂时，MVD=L入b=50.125二40倍。2.4供试品干扰初筛试验用BET水将注射用炎琥宁(批号051209)分别稀释成原液、1-10、1-20、1-40系列浓度，以各稀释浓度供试品将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0・5、0・25入b4个浓度的内毒素溶液，与蛍试剂混合进行抑制/增强试验，结果表明，供试品在较高浓度时对蛍试剂有干扰作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝脏等脏器勺功能，是导致肝细胞局

5、灶或弥漫性坏死的主要原因。肝细胞可出现局灶或弥漫性坏死'门脉周围纤维化。在供试品至少1-40稀释后则对賞试剂无干扰作用，见表2。2.5供试品干扰试验由于干扰初筛试验结果，选择灵敏度0.125EU/ml的蛍试剂(批号051209)，并用BET水将3批供试品1-40稀释后进行干扰实验。其中用BET水将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml作内毒素水溶液系列；再用BET水和3批1-40的供试品稀释液将内毒素制成0・25、0・125、0・06、0.03EU/ml作内毒素供试品溶液系列；再用BET水和3批1-40的供试品稀释液各做2支阴性对照。结果表明入s

6、、厂都在0.5入〜2入范围内，表明供试品经1-40稀释，使用灵敏度0.125EU/ml的蛍试剂试验，可以排除干扰，进一步验证了初筛试验的结果，见表3。表2供试品(批号021209)干扰初筛结果鳖试剂批号供试品稀释倍数内毒素系列浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125供试品阴性对照051109原液1：101：201:40+++++++++050210原液1:101:20+1:40++++++++++表3供试品(1-40)干扰试验结果内毒素浓度(EU/ml)内證素水溶液内證素供试品溶液(1—40)0512090510180509260.25+++++

7、+++++++++++0.125++++++++++++++++0・06・・・・+++卄・・・++・・0.03水溶液对照••供试品对照终点(EU/ml)Zs=0.125At=0.06At=0.105At=0.092.6细菌内毒素检查依照上述方法，将3批供试品1->40稀释，用2批0.125EU/ml賞试剂进行细菌内毒素检查，结果均符合中国药典对其有效性的规定，见表4。表4样品稀释溶液(1一40)的细菌内毒素检测结果蛍试剂批号样品批号供试品(1-40)溶液阴性对照供试品阳性阳性对照051109051209---++050218---++050126--