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1、注射用油细菌内毒素检查方法的研究【关键词】，注射用汕摘要注射用油为非水性液体，无法直接利用卷试剂进行细菌内毒素检查。本方法利用细菌内毒素对溶于水的特性对注射用油用水提取作而处理后，使Z适用于凝胶反应。结果表明：通过干扰试验、阳性对照和阴性对照试验，证实应用卷试剂作注射用油的细菌内毒素检查是可行的，而且具有灵敏、准确、快速的优点。关键词注射用汕；细菌内毒索；干扰试验；蛍试剂。注射用汕是静脉脂肪乳注射液的主要原料之一，在制剂屮的用量达10%~30%。目前，国内外脂肪乳剂作为静脉滴注的人容最注射液，其质量标准屮匕增加细菌内毒素检杳项目[1]o鉴于注射用汕的毛汕来源较复杂，在精制过程屮反复使用过除臭剂
2、、脱色剂、吸附剂和助滤剂等，精制步骤繁多复杂，工艺周期长，比较容易被污染，而且汕脂类物质木身容易被氧化酸败，使用的容器设备、管道装置不易进行清洗消毒，因而特别容易滋长微生物,成为工艺卫生控制的难点。因此，对注射用油进行细菌内毒素的检査和控制是十分必耍的,是确保脂肪乳注射液质量垂要的和关键的有效措施。1实验仪器与材料1.1实验仪器垂直流层超净工作台（SYT-JH-12型深圳美加净化设备厂），小型离心机（上海化学仪器厂），电热恒温水浴箱（HW2・型北京医疗设备厂），漩涡混合器（XK96-A型江苏新康仪器厂），经240°C2h除内毒索处理的玻璃仪器及内毒索检验专用器具。1.2实验试药供试样站（S）:
3、注射用油、辽宁北亚药用油公司（批号001027、010209）,广州第十制药厂（批号00X16、010523）o1.3实验试剂卷试剂（TAL）:广东淇江安度斯生物有限公司，批号010326,灵敏度0.125Eu/mL；广东湛江海洋生物制品厂，批号010515,灵敏度0.125Eu/mLo内毒素工作标准品（CSE）:中国药品生物制品检验所，批号00-0210Eu/mLo细菌内毒素检査用水（BET）:广东湛江安度斯工物有限公司，批号010316100mL/瓶;内毒素含量＜0.015Eu/mLo2实验方法与结果2.1懸试剂灵敏度复核试验按照中国药典2000版细菌内毒素检査方法的规定，复核试验用TAL
4、灵做度。取入=0.125Eu/mL的TAL,将细菌内毒素工作标准品用BET检查用水溶解，在漩涡混合器上处理15min,然后制成合适的稀释度，即2入，入，0.5A,0.25入备用。按检査法项下试验，计算TAL反应灵敏度测定值(Ac),结果见表1。Ac=lg-1(Zx/4)当入c在0.5-2A(包括0.5入和2A)时，方可用于细菌内毒素检验2.2供试品干扰试验本试验为测试并确认稀释后样品溶液中，超过最大有效稀释倍数Z内不含内毒素。分别用BET检査用水和1：10样品液稀释内毒素丄作标准品，使每管含内毒素分别为0.25-2A,即0.25Eu/mL,0.125Eu/mL,0.06Eu/mL,0.03Eu
5、/mL,每个浓度为4管,并同时有阴性对照，于每管均加入同样量的TAL0.1mL(0.125Eu/mL),在(37±1)°C反应60min。根据每管阳性反应结果，按照公式A=log-1(ZlogxQn)，计算反应终点浓度的几何平均值，判断样品在该浓度下是否有增强和抑制作用。表1TAL灵頌度复核试验TAL批号(略)2.3判断结果用BET检杳用水稀解内毒素标准品(入应在0.5~2之间)，表明所用卷试剂灵敏度等符合规定，因而确认本试验有效。用1:10样品液稀释内毒素标准品，入t应在0.5~2入t,因而确认本实验无抑制作用。当入tv0.5入，表明此浓度的样品溶液对TAL试验有增强作用，为入t>2入，表明
6、此浓度的样品溶液对TAL试验有抑制作用。2.4干扰试验结果分别采用辽宁北亚注射用油和广州十厂注射用油，用BET检查用水作提取处理稀释10倍后进行干扰试验，结果见表2~5。结果表明本试验有效、无增强和抑制作用，不存在干扰。结论：通过对两个来源注射用油检测，表明样站经提取处理稀释10倍后用A=0.125Eu/mL的TAL和0.25Eu/mL内毒素工作标准甜试验无增强和抑制作用，崔试剂法可用于样品测定，不产主干扰影响。表2—表5(略)2.5.1供试液的制备取0.5mL注射用汕于试管屮，加入5mLBET检查用水在漩涡混合器上混合5次，每次30s,然后用离心机在2500r/min下分离处理10min,水
7、层为含1:10样吊稀解液，取0.1mL用于内毒素试验。［2］另!R05mL去除内毒素的注射用油于试管中，先加入1mL内每素液（1.25Eu/mL）在漩涡混合器上混合5次，每次30s,再加入BET检查用水4mL,如上法混合均匀,然后用离心机在2500r/min卜•分离10min,取水层01mL用于作供试品阳性对照（二管）,检出样品内毒素限值为2.5Eu/mLo2.5.2检测操作程序与结果判断[3]按
