注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立

《注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立【摘要】目的：建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查方法。方法：按《中国药典》2005年版(二部)附录收载的细菌内毒素检查方法及指导原则进行实验。结果：注射用炎琥宁经1→40倍稀释后对鲎试剂无干扰作用。结论:细菌内毒素检测方法可用于注射用炎琥宁的热原检查。【关键词】细菌毒素鲎试剂炎琥宁注射用炎琥宁具有清热、解毒、抗炎的功能，临床应用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。临床用药广泛，又常用于静脉滴注，现标准为进行热原检查［１］，由于细菌内毒素检查具有灵敏度高，操作简便，重现性好的优点。现将细菌内毒素法

2、代替热原检查法。1仪器与试剂ZH2B2ENDER混匀器；DC3A型干式恒温器(南京三爱斯技术开发有限公司)；无热原吸头，微量移液器。细菌内毒素工作品(CSE，效价70EU/支，批号20053，中国药品生物制品检定所)；鲎试剂(TAL，灵敏度0.125EU/ml，批号051109，050210，湛江安度斯生物有限公司)；细菌内毒素检查用水(批号200050208，含量≤0.03EU/ml，湛江海洋生物制品检定厂)；注射用炎琥宁(供试品，规格每支0.2g，批号051209、0501018、050926，哈尔滨三联药业有限公司

3、)。2方法与结果2.1鲎试剂灵敏度(λ)复核按细菌内毒素检查法［２］，用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25λ4个浓度进行实验。结果表明，灵敏度为0.125EU/ml的鲎试剂符合规定。见表1。将表1数据代入公式λc=lg-1∑xiniλc=0.125。表1鲎试剂灵敏度复核实验结果TAL内毒素浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125灵敏度(λc)051109++--0.125050210++--0.125　　2.2注射用炎琥宁细菌内毒素限值(L)的确定L=K/M，式中K为规定的给药

4、途径，人用每千克体重每1h可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5.0EU/kg·h；M为人用每千克体重每1h给药的最大剂量，经计算，供试品M=1.0ml/kg·h，因此细菌内毒素理论限值为：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。2.3供试品的最大有效稀释倍数(MVD)选用灵敏度为0.125EU/ml鲎试剂时，MVD=Lλb=50.125=40倍。2.4供试品干扰初筛试验用BET水将注射用炎琥宁(批号051209)分别稀释成原液、1→10、1→20、1→40系列浓度，以各稀释浓度供试品将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5

5、、0.25λb4个浓度的内毒素溶液，与鲎试剂混合进行抑制/增强试验，结果表明，供试品在较高浓度时对鲎试剂有干扰作用，之外，其直接毒性作用可刺激心血管、肝脏等脏器与功能，是导致肝细胞局灶或弥漫性坏死的主要原因。肝细胞可出现局灶或弥漫性坏死，门脉周围纤维化。在供试品至少1→40稀释后则对鲎试剂无干扰作用，见表2。2.5供试品干扰试验由于干扰初筛试验结果，选择灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂(批号051209)，并用BET水将3批供试品1→40稀释后进行干扰实验。其中用BET水将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03

6、EU/ml作内毒素水溶液系列；再用BET水和3批1→40的供试品稀释液将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/ml作内毒素供试品溶液系列；再用BET水和3批1→40的供试品稀释液各做2支阴性对照。结果表明λs、λt都在0.5λ～2λ范围内，表明供试品经1→40稀释，使用灵敏度0.125EU/ml的鲎试剂试验，可以排除干扰，进一步验证了初筛试验的结果，见表3。表2供试品(批号021209)干扰初筛结果鲎试剂批号供试品稀释倍数内毒素系列浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125供试品阴性对照

7、051109原液------------------1：10------------------1：20------------------1：40+++++++++---------050210原液------------------1：10------------------1：20+-----------------1：40++++++++++--------表3供试品(1→40)干扰试验结果内毒素浓度(EU/ml)内毒素水溶液内毒素供试品溶液(1→40)0512090510180509260.25++++++++++

8、++++++0.125++++++++++++++++0.06----+++++---++--0.03----------------水溶液对照--供试品对照------终点(EU/ml)λs=0.125λt=0.06λt=0.105λt=0.092.6细菌内毒素检查依照上述方法，将3批供