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1、XX大学毕业论文注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立姓名：2014年6月25日注射用炎琥宁的细菌内毒素检查方法建立【摘耍】目的：建立注射用炎琥宁细菌内毒素检查方法。方法：按《屮国药典》2005年版（二部）附录收载的细菌内毒素检查方法及指导原则进行实验。结杲:注射用炎琥宁经1-40倍稀释后对蛍试剂无干扰作用。结论:细菌内毒索检测方法可用于注射用炎琥宁的热原检查。【关键词】细菌毒素卷试剂炎琥宁注射用炎琥宁具冇清热、解毒、抗炎的功能，临床应用于病毒性肺炎、病毒性上呼吸道感染。临床用药广泛，又常用于静脉滴注，现标
2、准为进行热原检查[1],由于细菌内毒素检查具有灵敏度高，操作简便，重现性好的优点。现将细菌内毒素法代替热原检查法。1仪器与试剂ZH2B2ENDER混匀器；DC3A型干式恒温器（南京三爱斯技术开发有限公司）；无热原吸头，微量移液器。细菌内毒索工作品（CSE,效价70EU/支，批号20053,中国药品生物制品检定所）;蛍试剂（TAL,灵敏度0.125EU/ml,批号051109,050210,湛江安度斯生物有限公司）；细菌内毒素检查用水（批号200050208,含M<0.03EU/ml,湛江海洋生物制品检定厂
3、）；注射用炎琥宁（供试品，规格每支0.2g,批号051209、0501018、050926,哈尔滨三联药业有限公司）。2方法与结果2.1卷试剂灵敏度⑴复核按细菌内毒素检查法[2],用BET水将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25X4个浓度进行实验。结杲表明，灵敏度为0.125EU/ml的卷试剂符合规定。见表lo将表1数据代入公式Xc=lg-l£xiniXc=0.125o表1蛍试剂灵敏度复核实验结果TAL内毒索浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125灵敏度(Xc)0511
4、09++-0.125050210++-0.1252.2注射用炎琥宁细菌内毒素限值(L)的确定L=K/M,式中K为规定的给药途径，人用每千克体重每lh可接受的内毒素最大剂量，注射剂的K=5.0EU/kgh；M为人用每千克体重每lh给药的最人剂量，经让算，供试品M=1.0ml/kgh,因此细菌内毒素理论限值为：L=K/M=5/1.0=5EU/ml。2.3供试品的最大冇效稀释倍数(MVD)选用灵敏度为0.125EU/ml磁试剂时，MVD=LXb=50.125=40倍。2.4供试品干扰初筛试验用BET水将注射用炎
5、琥宇(批号051209)分别稀释成原液、1->20、1->40系列浓度，以各稀释浓度供试品将细菌内毒素工作标准品稀释成2、1、0.5、0.25"4个浓度的内毒素溶液，与卷试剂混合进行抑制/增强试验，结杲表明，供试品在较高浓度时对餐试剂有干扰作用，Z外,其直接毒性作用可刺激心血管、肝脏等脏器与功能，是导致肝细胞局灶或弥漫性坏死的主要原因。肝细胞可出现局灶或弥漫性坏死，门脉周围纤维化。在供试品至少1->40稀释后则对逼试剂无干扰作用，见表2。2.5供试品干扰试验由于干扰初筛试验结果，选择灵敬度0.125EU/
6、ml的蛍试剂(批号051209),并用BET水将3批供试品1->40稀释后进行干扰实验。其中用BET水将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/m1作内毒素水溶液系列;再用BET水和3批1->40的供试品稀释液将内毒素制成0.25、0.125、0.06、0.03EU/m1作内毒素供试品溶液系列；再用BET水和3批1—40的供试品稀释液齐做2支阴性对照。结果表明肚、右都在0.5九〜2九范围内，表明供试品经1—40稀释，使用灵敏度0.125EU/ml的卷试剂试验，可以排除干扰，进一步验证了初筛
7、试验的结果，见表3。表2供试品(批号021209)干扰初筛结果蛍试剂批号供试晶稀释倍数内毒素系列浓度(EU/ml)0.250.1250.06250.03125供试品阴性对照1:101:20051109原液40+++++++++050210原液1:101:20+1:40++++++++++表3供试品(1—40)干扰试验结果内毒素浓度(EU/ml)内毒素水溶液内毒素供试品溶液(1—40)0512090510180509260.25+++++++++++卄+++0.125++++++++++++++++0.06
8、-…+++++…卄・・0.03水溶液对照―供试品对照终点(EU/ml)Xs=0.125Xt=0.06Xt=0.105Xt=0.092.6细菌内毒索检查依照上述方法，将3批供试品1-40稀释，用2批0」25EU/ml蛍试剂进行细菌内毒素检查，结果均符合中国药典对其有效性的规定，见表4。表4样品稀释溶液(1->40)的细菌内毒素检测结果卷试剂批号样品批号供试品(1-40)溶液阴性对照供试品阳性阳性对照051109051209—++
