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1、本科毕业设计（20__届）生物工程浙贝母基因组DNA提取方法比较研究摘要浙贝母（FritillariathunbergiiMiq.）是用于止咳化痰的常用中药，是著名的“浙八味”之一，其药用成分为生物碱。本文分别以取自宁波市鄞州区章水的狭叶浙贝、宽叶浙贝、多籽浙贝叶片为材料，分别采用CTAB法、SDS法、高盐低pH法和试剂盒法来提取浙贝母基因组DNA，并通过琼脂糖凝胶电泳、紫外分光光度计、PCR扩增对所提取的DNA样品进行纯度和浓度及完整性检测，以寻找适合浙贝母基因组DNA的提取方法。结果表明，用高盐低pH法提取的DNA浓度、纯度和完整性都较高，从经济角
2、度讲优于试剂盒提取法，是比较适合浙贝母新鲜叶片基因组DNA提取的方法。同时实验数据也表明上述四种方法都不适合浙贝母新鲜鳞茎组织基因组DNA的提取，而用CTAB法提取浙贝母鳞茎干粉基因组DNA的效果相对较好。由此表明，在进行浙贝母分子生物学研究时，采用新鲜叶片作为实验材料为宜。关键词：浙贝母；基因组DNA；提取ABSTRACTFritillariathunbergiiMiq.istraditionalChinesemedicineusedtoCoughexpectorant,istheoneoffamous"zhejiangeightflavour",i
3、tsmedicinalingredientsisalkaloid.Thepaperbasedonmaterialsrespectivelyfromleafwater、broadleaf、muchseedofFritillariathunbergiiMiq.inZhangshuitownofYinzhou,CTABmethod,SDSmethod,highsaltlowpHmethodandkitmethodwereusedtoextractgenomicDNAfromFritillariathunbergiiMiq.,andthroughtheagar
4、osegelelectrophoresis,uvspectrophotometer,PCRtoinspectpurity,concentrationandcompletenessofDNAsamples,tofindsuitablegenomicDNAextractionmethodforFritillariathunbergiiMiq..TheresultsshowthatusinghighsaltlowpHmethodtoextractDNAconcentration,purityandintegrityishigher,isbetterthank
5、itextractionfromtheeconomicangle,isasuitablegenomicDNAextractionmethodforfreshleafofFritillariathunbergiiMiq..Meanwhile,experimentdataalsoshowthatthefourmethodsofabovearenotsuitableforFritillariathunbergiiMiq.freshbulborganizationgenomicDNAextraction,buttheeffectofusingCTABmetho
6、dtoextractFritillariathunbergiiMiq.bulbpowdergenomicDNAIsrelativelywell.Thus,freshleafshouldadoptasexperimentalmaterialinFritillariathunbergiiMiq.molecularbiologyresearch,.Keywords:FritillariathunbergiiMiq.;GenomicDNA;extraction目录1前言12材料与方法32.1实验材料32.1.1材料32.1.2主要化学药品和试剂42.1.3主要
7、仪器和设备42.1.4主要试剂及配制方法52.1.5其他材料62.2方法62.2.1材料的处理62.2.2浙贝母基因组DNA提取方法72.2.3紫外分光光度计检测92.2.4琼脂糖凝胶电泳92.2.5琼脂糖凝胶染色成像103结果与分析113.1不同方法对浙贝母基因组DNA提取质量的影响113.2不同品种对浙贝母基因组DNA提取质量的影响123.3不同组织部位对浙贝母基因组DNA提取质量的影响143.4PCR扩增144讨论15参考文献17141前言贝母为百合科多年生草本植物的鳞茎，是止咳化痰的一味常用中药。主要分为川贝母、浙贝母、伊贝母、平贝母和湖北贝母
8、。目前临床上应用的主要是浙贝母和川贝母。浙贝母（FritillariathunbergiiMi
