【精品】专业论文文献-葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离与鉴定研究

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1、葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离与鉴定研究葡萄果酷发酵用醋酸菌的分离与鉴定研究［摘耍］主耍采用土壤以及烂化的葡萄皮作为样品，并进行利用增值培养以及定量、定性等培养手段，同时通过首次鉴定及再次鉴定等，从而筛选出一株具有较高醋酸、产量稳定的醋酸菌。［关键词］葡萄果酷醋酸菌分离鉴定1刖5所谓的葡萄果醋，就是利用葡萄酒或者是葡萄进行产生的残渣皮，同时经过采用现代化生物技术进行酿制，进而形成的一种酸味饮料，该饮料含有独特的风味以及丰富的营养。葡萄果醋同时具备水果与食醋的营养保健作用，以及丰富的维生素和有机酸。能够有效调节血脂，抗氧化等功能。2材料准

2、备首先准备的材料是醋酩•，苴属于一种无核紫葡萄。其次是菌种，其选择的是活性干酵母D254o再次是试剂的准备，有酚瞅指示剂、酵母膏、葡萄糖、NaOH及无水乙醇等。最后就是培养基的准备，有醋酸菌固定培养基及醋酸菌保藏培养基，其中需要的琼脂、酵母膏、葡萄糖、碳酸钙及无水乙醇，分别是2%、1%、1%、2%、6%vol；1.8%、1%、1%、0.5%,6%vol,两屮培养基均需自然pH值。而醋酸菌液体培养基需要1%的葡萄糖及酵母膏，6%vol的无水乙醇，也是自然pH值。3葡萄果醋发酵用醋酸菌的分离研究3.1增殖培养针对醋酸菌的分离研究，首先采

3、用容量为20mL的葡萄醋，该葡萄酷属于自然发酵的，接着放入容量为250ml的三角瓶当中，同时再添加容量为100ml的基础培养基，之后将其处T32°C恒温环境中进行培养，培养时间为两天。通过两天培养之后，进行提取容量为lml的增殖液，并放入无菌蒸憎水当中，该蒸憾水的容量为9nd,然后进行稀释至三个梯度，分别是10-5.10-6及10-7,在这三个梯度里提取稀释液，每一个梯度均提取0.2mlo通过采用平板划线的方法与倾注的方法进行接种，并放置于分离培养基当中，给予每个梯度的平板分别三个，放在32°C的环境中进行培养，培养时间最长不能超过

4、3天，最短不能低于2天，最后认真观察。在平板中的稀释液有着不一致的稀释度，所以在进行挑选单菌落时，必须从该平板中进行挑选，才能挑选出形态相同、长势较好以及菌落完整的单菌落。经过单菌落纯化后的菌株，在斜面保藏培养基进行接种，然后通过在32°C的环境下进行两天培养Z后，保藏在4°C的冰箱里。3.2醋酸菌定性培养选取一环活化的菌株，分别在容量为100ml的基础培养基里进行培养，此基础培养基中含有3.0%vo1乙醇，并放在32°C恒温环境当中进行静置培养，培养时间为三天。然后通过采用离心机将菌体清除,在一个小烧杯里放入容量为5ml的无菌体培

5、养液，再利用浓度为0.lmol/L的氢氧化钠溶液进行中和，直到其培养液显示为中性为止。故后滴入5.0%的FeC13溶液，滴入的滴数为5滴，观察其变化情况,如果有红褐色的沉淀出现，那么该菌株很大程度上就是醋酸菌。把醋酸菌菌株放在斜面培养基里进行接种，经过在32°C环境中进行培养2天之后，保存于4°C的冰箱中。3.3醋酸菌定量培养选出良好的醋酸菌之后，分别放入醋酸菌液体培养基里进行接种，并在30°C的环境下进行3天的培养，然后进行测定培养后的醋酸菌的产酸量，通过采用碱式滴定的方法进行测定，其公式为VVOXCNaOHX60L,在这个公式当

6、中，V0表示的是在选取空白培养基作为对照滴定所用氢氧化钠的体积数，CNaOII表示的是氢氧化钠的浓度，60指的是醋酸的分了量，L表示的是样品的体积。表示样品进行发酵过程中所利用的氢氧化钠的体积数。最后将产酸量比较高的菌株进行筛选出来，同时再进行第二次筛选。4葡萄果醋发酵用醋酸菌鉴定分析3.1首次鉴定首先仔细观察菌株接种的形态变化。在平板培养基里进行接种的菌株，通过在32°C恒温环境中进行培养两天Z后，利用革兰氏染色法将获得的单菌落进行染色,并经过镜检，认真观察其染色的反应变化和形态的基本大小特点。其次进行生理生化实验。进行实验乙醇的

7、过氧化和氧化。最后就是鉴定的一般措施。将待测菌株点种于鉴定培养基的平板当中，每六个菌株点种在一个平板上，培养环境中最低温度是30°C,最高温度是32°C,培养3〜15天后，观察菌体在3天、6天、12天及15天的吋间段中的变化情况。若在菌落附近没有透明圈产纶，则未能将乙醇氧化，从而未能获取乙酸的菌株。菌落附近有透明圈出现，则表明该菌株能氧化乙醇成乙酸。二醋酸菌的属能需要加深氧化醋酸，让醋酸钙向碳酸钙进行转化,通过培养一定的时间Z后,如果在菌落附近出现未透明的乳口色及伴有彩色光泽，这说明在液体基础培养基里存在乙醇氧化。此外，需要注意观察

8、其是否产生无菌膜。4.2再次鉴定菌株通过产酸性试验及革兰氏染色之后，并进行纶理化试验。其结果是由于在革兰氏染色的过程中，若没有控制好准确的时间，就会把革兰氏阴性菌逐渐向革兰氏阳性转化，同时短暂的复染时间也会让菌株的形态模糊，在显微镜下