黑米中矢车菊素―3―葡萄糖苷的鉴定与含量分析

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1、黑米中矢车菊素一3—葡萄糖昔的鉴定与含量分析摘要：以黑米为材料，采用HPLC-DAD法和UPLC-MS/MS法，鉴定其中的花青素主要为矢车菊素-3-葡萄糖昔,并采用HPLC-DAD法对其进行定量分析。结果表明，黑米中的矢车菊素-3-葡萄糖昔含量达(1.017±0.028)mg/g,远高于另外5种有色稻米中的矢车菊素-3-葡萄糖昔含量。该方法准确、灵敏、高效、稳定，可用于高花青素含量的黑米品种筛选。关键词：黑米;花青素;矢车菊素-3-葡萄糖昔;超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS);高效液相色谱-

2、二极管阵列检测器(HPLC-DAD)中图分类号：0657.7+2文献标识码：A文章编号：0439-8114(2014)23-5836-03DOI：10.14088/j.cnki.issn0439-8114.2014.23.054有色稻米是中国极其珍贵的特异水稻种质资源，其糙米(颖果)带有异于普通稻米的色泽，成色原因正是由于稻米种子发育过程中种皮沉积了大量花青素[1,2]0就种皮颜色而言，可分为紫(黑)米、红米、黄米和绿米，其中以紫(黑)米和红米最常见⑶。花青素(Anthocyanins)是广泛存在于自然

3、界植物中的水溶性天然色素，属于黄酮类物质，在自然状态下多以糖昔化和酰基化的形式存在，称为花色昔［4］。Abdel-all等⑸研究结果认为，组成黑米与红米的主要花青素昔为矢车菊素-3-葡萄糖昔(Cyanidin-3-glucoside,C-3-G)。施怡如等⑹对具紫色植株的水稻品种Purpleputtu的研究表明，该植株紫色或红色的组织中均含有花青素，其中主要成分为矢车菊素(Cyanidin),而花青素含量最多的部位就是颖果皮。Reddy等萃取紫黑色、白色、褐色颖果皮的试验表明，白色及褐色颖果皮的水稻品种

4、并未检测到花青素，但大部分紫黑色颖果皮的品种含有Cyanidin-3-glucoside和Peonidin-3-glucoside两种花青素，且以Cyanidin-3-glucoside为主要成分，颜色愈深的颖果皮含有较多的花青素。长期以来，对黑米评价研究主要集中在农艺性状和主要营养成分的分析，而对其生理活性物质方面的研究较少［7］。根据国内外研究现状，目前花青素常用的检测方法有可见分光光度法、紫外-可见分光光度法、高效液相色谱法等［8-10］。但单纯使用UV或HPLC均存在检测灵敏度低、检测用时长等不

5、足［ll］o超高效液相色谱串联质谱(UPLC-MS/MS)具有选择性好、灵敏度高、重复性好等优点。本试验以黑米为试验材料，建立UPLC-MS/MS测定方法，分析黑米中矢车菊素的含量，旨在为有色稻米花青素的组分分析提供新的方法，可用于从有色稻米种质资源中筛选高花青素含量的品种。1材料与方法1.1材料与试剂黑米样品：黑津原1号，由天津市原种场提供，其他样品由本实验室提供;矢车菊素-3-葡萄糖昔（Cy-3-glu）标准品（纯度98%）购自百灵威科技有限公司;常规试剂均为分析纯，购自国药集团化学试剂有限公司;试

6、验用水为去离子水。1.2仪器Waters2695-2998型高效液相色谱仪-二极管阵列检测器（Waters,美国）；KQ-250B型超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）;Laborota-4010型旋转蒸发仪（Heidolph,德国），MSI振荡器（IKA,德国）;ACQUITYUPLC-XevoTQ型超高效液相色谱-串联质谱系统（Waters,美国），配有电喷雾离子源（ESI）及MassLynx4.1数据处理系统。1.3方法1.3.1前处理将适量黑米样品用旋风磨粉碎，过80目筛，获得试验用黑米粉。准

7、确称取5g样品于250mL三角瓶内，加入50mL90%甲醇溶液（含0.1%盐酸，V/V),超声提取30min,将样品提取液通过滤纸，过滤至100mL棕色容量瓶中，重复提取两次，合并两次提取液，摇匀，甲醇定容,过0.22um滤膜后，待测。1.3.2标准溶液的配制精确称量Cy-3-glu标准品1.08mg,用甲醇溶解定容至10mL,得到108Ug/mL的标准溶液。使用前配制成不同浓度的标准溶液。1.3.3液相色谱条件InertsilODS-3色谱柱(250mmX4.6mm,5um),流动相A(0.1%甲酸溶

8、液)-B(含0.1%甲酸的甲醇溶液)，流速为0.8mL/min;梯度洗脱：0〜5min,A:B(10:90〜30:70);5〜12min,A：B(30：70〜50:50);12〜15min,A:B(10:90);检测波长为519nm;柱温为30°C;进样量为10ULo1.3.4超高效液相色谱-质谱条件UPLC条件：色谱柱AcquitytmUPLCBEHC18(2.1mmX100mm,1.7um),流动相A(0.1%甲酸溶液)-B(#0.1%