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1、黄艮多糖中脱蛋白方法探究摘要:目的:为了筛选最佳的黄艮多糖的脱蛋白效果。方法:比较sevage法,蛋白酶法,乙酸铅法和732树脂法脱除黄艮多糖中的蛋白质的效果。结果:蛋白酶法和732树脂法都可以较好的除去黄艮多糖中的蛋白质。尤其以732树脂静态吸附效果为最佳,多糖得率达88.6%,蛋白质含量降低至0.91%0而且732树脂成本低,快速,吸附效果好,样品损失小,便于在黄艮多糖的制备中推广使用。结论:732树脂静态吸附法是最佳的黄艮多糖脱蛋白方法。关键词:黄艮多糖;脱蛋白;732树脂中图分类号:R282.710.2文献
2、标识码:A文章编号:1673-7717(2008)03-0614-02StudyMethodsforRemovingProteinFromtheAstragalusPolysaccharidesExtractGAOMei-feng1,2,YUTing-ting2(1.NanjingUniversityofChineseMedicine,Nanjing210029,Jiangshu,China;2.SchoolofLifeScienceandTechnology,ChinaPharmaceuticalUniversi
3、ty,Nanjing210009,Jiangshu,China)Abstract:DifferentmethodsaboutremovingproteinfromtheAstragalusPolysaccharides(APS)extractwasstudied,suchasSevage,Protease,leadacetateand732resinmethods・TheresultsindicatedthattheProteaseand732resinweregoodremoving-proteinmethods
4、.Especially,theAPSrecoverycouldreach88.6%andproteinresidualcontentwas0.91%throughstaticadsorptionby732resin.Furthermore732resinpossessesmanyadvantagessuchaseconomic,rapid,safeandminimumsamplelossandsoon.Therefore732resinwasthebestperformanceforremovingproteinf
5、romAPSextract.Keywords:astragaluspolysaccharides;removalofprotein;732resin黄艮为豆科植物蒙古黄艮[Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge)Hsiao]或膜荚黄茯[Astragalusmembranaceus(Fisch.)Bge]的干燥根,是一种常用的中药。性味甘、微温,归脾、肺经[1]。黄艮含有多糖、蛋白质、生物碱、氨基酸、黄酮类、昔类、微量元素等多种生物活性物质,其中黄艮
6、多糖(Astragaluspolysaccharides,APS)是黄艮主要生物活性成分。黄艮多糖具有增强机体的免疫功能,降血糖、抗应激、抗肿瘤、抗病毒、抗辐射、抗氧化等多种药理功效[2]。有报道黄棧多糖中蛋白质含量高于15%,因此去除黄艮多糖中的蛋白质是多糖精制过程中比较关键的一步,传统的脱蛋白方法有Sevage法、三氯醋酸法、蛋白酶法、透析法等,但是这些方法都存着一定问题,如有机溶剂用量大,多糖得率不高,蛋白去除不完全等问题。本实验选用了几种相对安全、操作方便的脱蛋白方法进行研究,并与传统的Sevage方法进行
7、了比较。1材料与方法1.1原料与试剂黄艮多糖粗品,自制;中性蛋白酶(7万U/g),无锡酶制剂厂;三水合乙酸铅,广州化学试剂厂;732树脂,天津海光化工有限公司;无水乙醇,氯仿,正丁醇,95%乙醇均为分析纯。FA2104电子天平,上海天平仪器厂;电热恒温水浴锅,上海跃进医疗仪器厂;德国BekmanH-ll冷冻离心机;凝胶层析柱1cmx40cm;LGL型冷冻干燥机;752分光光度机,上海精密仪器有限公司。1.2Sevage法除蛋白[3]配制一定浓度的黄艮粗多糖溶液中,加入1/3体积的sevage试剂(氯仿:正丁醇为4:
8、1),振摇20min,静置15min至完全分层,离心,取水层,于280nm处测其吸收值。重复上述过程直至280nm处吸收值稳定。1.3中性蛋白酶法脱蛋白[4]配制一定浓度的黄艮粗多糖溶液,加2.0U/mg蛋白酶,酶解6h后,沸水煮5min,加入3倍体积无水乙醇,离心得沉淀后,复溶,测多糖及蛋白质含量。1.4乙酸铅法除蛋白⑸配制一定浓度的黄栈粗多糖溶液,向里滴