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1、裙带菜多糖3种脱蛋白质方法比较探究摘要：目的筛选裙带菜多糖脱除蛋白质的最佳方法。方法采用Sevag法、三氯乙酸法和酶法对裙带菜多糖进行脱蛋白质处理，比较不同方法处理后多糖的脱蛋白质率及多糖损失率，确定最佳的除蛋白质方法。结果酶法的多糖损失率最低,为10.22%,脱蛋白质率最高，为61.10%；三氯乙酸法多糖损失率12.13%,脱蛋白质率57.37%；Sevag法多糖损失率14.21%,脱蛋白质率54.12%。结论酶法是裙带菜多糖脱蛋白质的最佳方法。关键词：裙带菜多糖；脱蛋白质；酶法中图分类号：Q946.3文献标识码：A文章编
2、号：1672-979X（2010）03-0096-03多糖是与人类生活紧密相关的一类生物高分子，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、降血脂、抗凝血等多种生物活性。近年研究表明，裙带菜多糖有显著的抗肿瘤作用。目前，国外（尤其是日本）对裙带菜的营养和药用价值的研究比较深入，国内的研究尚处于起步阶段。裙带菜作为安全经济的食品已广泛用于预防乳腺癌。裙带菜粗多糖系用水提醇沉法从裙带菜（Undariapinnatifida）孑包子叶中提取，常含有一定量的蛋白质。因此,尽可能地去除粗多糖中的蛋白质并保留多糖十分重要。传统Sevag法和三
3、氯乙酸法去除蛋白质通常需要重复数10次，费时，样品损失很大，而且需要处理废液。我们以脱蛋白质率和多糖损失率为指标，尝试用酶法去除蛋白质纯化裙带菜多糖。1材料裙带菜（大连产）；木瓜蛋白质酶：岩藻多糖（天津一方科技公司）；考马斯亮蓝G-250、牛血清蛋白质（南京建成生物工程研究所）；浓硫酸、苯酚、无水乙醇、氯仿、正丁醇、三氯乙酸均为国产分析纯；低速离心机（北京医用离心机厂）；722可见分光光度计（上海菁华科技仪器公司）。2试验方法与结果2.1标准曲线的制备2.1.1糖标准曲线称取干燥至恒重的岩藻多糖2mg,置10mL容量瓶中，加
4、水溶解后稀释至刻度制成0.2mg/mL贮备液。分别吸取贮备液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL用蒸馆水补至2.0mL,然后向各管加入6%（w/v）苯酚试剂1.0mL及浓硫酸5.0mL,静置lOmin,振摇，室温放置15min。以0为空白，在490nm波长处测吸光度，以吸光度（A490mm）为纵坐标，岩藻多糖含量（ug）为横坐标绘制标准曲线。回归方程为：Y=0.0012X+0.0029,r=0.9992,呈良好的线性关系。2.1.2蛋白质标准曲线称取牛血清白蛋白质10mg,置100mL容量瓶中，加蒸徭水溶解后稀释至
5、刻度制成贮备液。量取考马斯亮蓝G-250溶液10mL加入40mL蒸馆水中混溶制成贮备液。分别吸取牛血清白蛋白质贮备液0,0.2,0.4,0.6,0.8,1.0mL加蒸饱水补至1.OmL,向各管中加入5mL考马斯亮蓝G-250贮备液，混匀后室温静置5min,以0为空白，在595nm波长处测吸光度，以吸光度(A595nm)为纵坐标，蛋白质含量(ug)为横坐标绘制标准曲线。回归方程为：Y=0.0038X+0.005,r=0.9994,呈良好的线性关系。2.2多糖的提取取裙带菜干粉100g与95%乙醇1：1混合，80°C水浴冷凝回流
6、提取2h,4层纱布过滤，滤渣干燥后，加.K50倍量蒸馆水9(TC水浴5h,4层纱布过滤后3000r/min离心10mino滤液减压浓缩至一定体积加入95%乙醇至醇浓度为80%,静置过夜后过滤，用无水乙醇、丙酮、石油瞇洗涤，干燥得沉淀。将沉淀溶于适量水中得多糖溶液。2.3多糖溶液中多糖和蛋白质含量的测定2.3.1多糖含量用苯酚-硫酸法，以岩藻多糖为对照品测定，多糖含量为55.42%。2.3.2蛋白质含量考马斯亮蓝G-250法，以牛血清白蛋白质为标准品测定，蛋白质含量5.43%。2.4脱蛋白质2.4.1Sevag法取裙带菜多糖5
7、g,配成饱和多糖水溶液，加入氯仿：正丁醇（5：1）,超声振荡20min,混匀，3000r/min离心10rain,除去水相与有机相间的蛋白质,水相仍按照此法反复除蛋白质至两相间没有白色蛋白质。氨水调pH8-9,加双氧水过夜，透析，浓缩，4倍无水乙醇沉淀，丙酮洗涤干燥得多糖。将多糖溶于适量水中得脱蛋白质液lo2.4.2三氯乙酸法称取裙带菜多糖5g配成饱和多糖水溶液，以1：1等体积加入3%三氯乙酸溶液，静置2h,离心取上清，按照此法反复除蛋白质至两相间没有白色蛋白质。经透析，浓缩，4倍无水乙醇沉淀，丙酮洗涤干燥得多糖。将多糖溶于
8、适量水中得脱蛋白质液2。2.4.3酶法称取裙带菜多糖5g配成饱和多糖水溶液，加入一定量木瓜蛋白质酶配成酶含量为3%的样品溶液,6（TC水浴酶解2h,反应后沸水浴灭活5min,经透析，浓缩，4倍无水乙醇沉淀，丙酮洗涤干燥得多糖。将多糖溶于适量水中得脱蛋白质液3。2.5脱蛋白质液中多糖及蛋白质
