麻黄多糖中蛋白含量测定及脱蛋白方法的比较

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1、2011年第39卷第2期中医药学报Vo1．39，No．2，2011ActaChineseMedicineandPharmacology·73·麻黄多糖中蛋白含量测定及脱蛋白方法的比较梁军，夏永刚，杨炳友，王秋红，匡海学(黑龙江中医药大学北药基础与应用研究省部共建教育部重点实验室，黑龙江省中药及天然药物药效物质基础研究重点实验室，黑龙江哈尔滨150040)摘要：目的：建立麻黄多糖中蛋白的含量测定方法，比较不同脱蛋白方法的蛋白脱除效果。方法：水提醇沉提取麻黄多糖，Sevag法、三氯乙酸法、木瓜蛋白酶一Sevag法去除蛋白，考马斯亮蓝法测定蛋白质含量。结果：麻黄多糖脱蛋白前的蛋白含量为26．30％。

2、Sevag法、三氯乙酸法和木瓜蛋白酶一Sevag法脱蛋白后的蛋白含量分别为l5．o0％，6．8O％和1．70％；三种方法的蛋白脱除率分别为42．97％，74．14％和93．54％。结论：木瓜蛋白酶一Sevag法的脱蛋白效果较好，考马斯亮蓝G一250染色法操作简便，准确性好，不失为多糖中蛋白含量测定的一种好方法。关键词：麻黄多糖；蛋白含量测定法；脱蛋白中图分类号：R284．1文献标识码：A文章编号：1002—2392(2011)02—0073—032010版《中国药典》收载的麻黄品种为草麻黄麻黄多糖的脱除效果。EphedrasinicaStapf、中麻黄EphedraIntermedia1仪器与

3、试药SchrenketC．A．Mey．或木贼麻黄Ephedraequisetina721型紫外可见分光光度计(上海元析仪器有限Bge．的干燥草质茎。辛、温，微苦。具有发汗散寒，宣公司)；AB265一S电子分析天平(梅特勒一托利多仪肺平喘，利水消肿的功效J。麻黄是一味具有近二器有限公司)；电热恒温水浴锅(上海医疗器械五厂)。千年广泛应用历史的我国特产药材，也是第一个作为考马斯亮蓝G一250(Amresco公司)；牛血清白蛋白东方传统药材进行化学成分及药理研究并介绍给西方(Sigma公司)；其余化学试剂均为国产AR级。的重要药物。麻黄药材购于山西大同药材公司。经黑龙江中医多糖是麻黄中的主要有效成分

4、之一_3．4J，影响其药大学中药资源学教研室王振月教授鉴定为麻黄科植多糖纯度最主要的物质为蛋白。如何快速、简单、准确物草麻黄(EphedrasinicaStapf)的干燥草质茎，符合地对其中的蛋白质含量进行检出以及除去，无疑将直《中国药典)2010版相关质量标准。样品标本保存于接影响着麻黄多糖的纯化效率和开发应用。目前关于黑龙江中医药大学药学院(20070016)。麻黄多糖中蛋白质含量的测定方法还无专门报道，为2方法与结果此，我们建立了考马斯亮蓝G一250染色法_5对麻黄2．1麻黄多糖的提取工艺多糖中蛋白进行测定，同时考察了三种脱蛋白方法对麻黄多糖的提取按照文献进行提取，最终得到麻黄总多糖冻干

5、品。收稿日期：2010—12—10修回日期：2011—02—222．2试剂的配制基金项目：十二五国家科技部重大专项课题“重大新药创制”专项课题考马斯亮蓝试剂的配制：称取120．Omg考马斯亮(编号：2011ZX09102—006一O1)；国家自然科学基金面上项蓝G250，在烧杯中溶于43．2mL无水乙醇，加入85％目(编号：30973870)；黑龙江中医药大学博士创新基金(编(W／V)的浓磷酸118．8mL，用蒸馏水定容至1L，双层号：B201002)；黑龙江省博士后科研基金(2010)作者简介：梁军(1984一)，女，硕士，研究实习员，主要从事中药质量控滤纸过滤，避光保存。制方法研究。2．3

6、蛋白质标准溶液的制备及标准曲线的测定通讯作者：匡海学(1955一)，男，教授，博士研究生导师，主要研究方称取白蛋白5．1mg置于50mL容量瓶中，加蒸馏向为中药及天然药物药效物质基础研究。E—mail：水至刻度，即得到0．102mg／mL的蛋白标准液，4~C储hxkuang@hotmail．corn存(用后放人冰箱)。分别吸取上述标准牛血清白蛋中医药学报2011年第39卷第2期ActaChineseMedicineandPharmacologyVo1．39，No．2，2011白溶液0，0．1，0．2，0．3，0．4，0．5，0．6mL置带塞试管方法具有可行性。结果见表2。中，分别用蒸馏水补足至

7、1mL，加人考马斯亮蓝G2502．5不同脱蛋白方法的考察显色剂5．0mL，混匀，30℃恒温水浴5min，冷却至室温总多糖中往往含有蛋白质，常采用的脱蛋白方法后于595nm处测定吸光度，以0号试管为空白对照，有三种_8J：Sevag法、三氯乙酸法和木瓜蛋白酶一以吸光度对标准蛋白含量作图得标准曲线。结果见表Sevag法脱蛋白。1和图1。2．5．1Sevag法称取麻黄多糖溶解成5％的水溶表1蛋白质标准曲