米糠多糖脱蛋白方法和条件优化

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1、米糠多糖脱蛋白方法和条件优化　　摘要：木瓜蛋白酶结合三氯乙酸（TCA）法对米糠粗多糖进行脱蛋白，研究不同的酶添加量、酶解温度、酶解pH、酶解时间、TCA用量、TCA处理次数、TCA处理时间对米糠粗多糖脱除蛋白效果和多糖损失的影响。结果表明，米糠粗多糖脱蛋白最佳工艺条件为酶添加量140U/mL，酶解最适温度55℃，最适pH6.0，时间60min；再用6%TCA作用30min，3次重复，蛋白质脱除率为85.52%，多糖损失率为11.20%。关键词：米糠多糖；脱蛋白；三氯乙酸（TCA）法；蛋白质脱除率；多糖损失率中图分类号：TS2

2、10.9文献标识码：A文章编号：0439-8114（2013）20-5014-04RemovingProteinandOptimizingConditionfromRiceBranPolysaccharideXUNYun1，ZHANGYing-qing2（1.BiologicalEngineeringInstitute，WuhanInstitueofTechnology，Wuhan430072，China；2.BioengineeringCollege，HubeiUniversityofTechnology，Wuhan430

3、068，China）Abstract：Thetechnologyofproteinremovingfrom10ricebranpolysaccharidewasstudiedbythecombinationofpapainandtrichloroaceticacid（TCA）.Theresultsshowedthatthebesttechnologicalconditionswereasthefollowsenzymedosage140U/mL，hydrolysistemperature55℃，pH6.0，60min.The

4、nthepolysaccharidesweretreatedwith6%TCAthreetimesfor30min，therateofprotein-removingwas85.52%andtherateofpolysaccharide-losingwas11.20%.Keywords：ricebranpolysaccharide；proteinremoving；trichloroaceticacid（TCA）method；therateofprotein-removing；therateofpolysaccharide-l

5、osing多糖是与人类生活紧密相关的一类生物高分子物质，具有抗肿瘤、抗氧化、免疫调节、抗病毒、降血脂、抗凝血等多种生物活性。米糠是稻谷加工过程中的农副产物，通常米糠含油脂14%～24%、蛋白质12%～18%、无氮浸出物33%～35%、水分7%～14%、灰分8%～12%，此外还含有生育酚、生育三烯酚、脂多糖、谷维素、二十八碳烷醇、？琢-硫辛酸、角鲨烯、神经酰胺等多种天然抗氧化剂和生理功能卓越的生物活性物质。米糠中无氮浸出物主要为淀粉、纤维素和半纤维素，一部分半纤维素构成了水溶性米糠多糖（Ricebran10polysaccha

6、ride，RBS），它是一种结构复杂的杂聚糖，由木糖、甘露糖、鼠李糖、半乳糖、阿拉伯糖和葡萄糖等组成[1-4]。米糠多糖的提取方法有多种，包括传统热水浸提法、超声波辅助提取法、高压脉冲辅助提取法、微波辅助提取法等[5]。这些方法提取得到的米糠粗多糖都含有一定量的蛋白质。这些杂蛋白影响了米糠多糖的结构和功效。故脱除米糠粗多糖中的杂蛋白并保留米糠多糖十分重要[6]。传统Sevag法和三氯乙酸（TCA）法去除蛋白质通常需要重复10次，费时，样品损失很大，而且需要处理废液[7]。而酶法是利用蛋白酶将粗多糖中的蛋白质水解，条件温和，效

7、率高[8]，但此法往往会引入新的蛋白质杂质。所以与TCA法相结合可取得较好的效果。试验以脱蛋白质率和多糖损失率为指标，采用木瓜蛋白酶法结合TCA法研究米糠粗多糖脱蛋白工艺，通过对各工艺参数进行优化，确定最佳工艺条件，以期为米糠粗多糖的纯化提供理论依据。1材料与方法1.1材料1.1.1米糠米糠购自湖北百信食品有限公司研发中心。1.1.2试剂α-淀粉酶、木瓜蛋白酶购自广州利源化工有限公司；葡萄糖、三氯乙酸、98%浓硫酸、75%乙醇、氯化钠、氯化氢、氢氧化钠、牛血清蛋白、考马斯亮蓝均为分析纯101.1.3仪器UV-3000紫外可见

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