实验五有关物质的色谱检查

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1、实验课顺序：5实验名称实验五冇关物质的色谱检查实验班级07级药学本科实验课时间4.30课时数4分组10组实验目的:1、掌握HPLC法测定原料药屮冇关物质的原理与限最计算方法。2、掌握TLC法测定原料药中有关物质的原理与测定方法。3、熟悉高效液相色谱仪的工作原理和操作方法。4、熟悉粘合薄层板的制备与活化。5、了解高效液和色谱仪的主要部件和F1常维护实验原理：实验器材:试药：硅胶H,硅胶GF254,对二甲氨基苯甲醛，盐酸普鲁卡因注射液，马来酸氯苯那敏及氧氟沙星原料药。仪器：高效液色谱仪，二极管阵列检测器，ODS柱，层析缸，玻板，喷雾器，点、样用微量注射器或微

2、量吸管。实验内容与方法：（一）盐酸普鲁卡因注射液中对氨基苯甲酸检查HC1ProcaineHydrochloride(C13H20N2O2♦HC1272.77)木品为盐酸普鲁卡因加氯化钠适最使成等渗的火菌水溶液。为无色的澄明液体。［检查］对氨基苯甲酸精密最取本品,加乙醉制成每ImL中禽盐酸普鲁卡因2.5mg的溶液,作为供试品溶液。另取对氨基苯甲酸对照品，加乙醇制成每1汕中含30ug的溶液，作为对照站溶液。照薄层色谱法（附录A）试验，吸取上述两种溶液各10ul,分别点于含有竣甲基纤维索钠为黏合剂的硅胶H薄层板上，用苯-冰醋酸-丙酮（14：1：1：4）为展开剂

3、,展开示，取出晾干，用对二甲氨基苯甲醛溶液（2%对二甲氨基苯甲醛乙醇溶液lOOmL,加冰醋酸5讥制成）喷雾显色。供试品溶液如显与对照品溶液相应的杂质斑点，其颜色与对照品溶液的主斑点比较，不得更深。（二）马来酸氯苯那敏有关物质检查ChlorphenamineMaleate（C16H19CIN2•C4H4O4390.87）本品为N,N-二甲基-g（4-氯苯基）-2-毗呢丙胺顺丁烯二酸盐。［检査］有关物质取木品，加氯仿制成每lmL中含50mg的溶液，作为供试品溶液；精密量取适：g,加氯仿稀释成每中含0.10mg的溶液，作为对照溶液。照薄层色谱法（附录A）试验，

4、吸取上述两种溶液各10mL,分别点于同一硅胶GF254薄层板上，以醋酸乙酯-甲醇-稀醋酸（5：3：2）为展开剂，展开后，晾干，在紫外光灯（254nm）下检视。供试品溶液除显氯苯那敏与马來酸两个斑点外，如显其他杂质斑点,与对照溶液的主斑点比较,不得更深。（三）氧氟沙星有关物质的检查H3COH〔C18H20FN3O4361.38)本品为（±）-9-氟-2,3-二氢-3-甲基-10-（4-甲基-1-哌嗪基）-7-氧代-7H-毗唳并［1,2,3-de］-［l,4］苯并恶嗪-6-竣酸。为口色或微黄色结晶性粉末。［检查］有关物质照高效液相色谱法测定（附录B）o色谱条

5、件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以0.05mol/L枸椽酸溶液-乙M（79：21）用三乙胺调节pH值至4.0为流动相;流速约为每分钟l・2mL；检测波长为293nm0理论板数按氧氟沙星峰计算应不低于2500。测定法取本品，加流动相制成每lmL中含lmg的溶液，作为供试品溶液；量取适量，加流动相稀释成侮ImL中含0.05mg的溶液，作为对照溶液。取对照溶液10ul注入液相色谱仪,调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高为满虽程的20%；再取供试品溶液10u1注入液相色谱仪，记录色谱图至主成分峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图上各杂质峰而积的和

6、不得人于对照溶液色谱图主峰而积的1/5O并用二极管阵列检测器检测样品峰的纯度。实验注意事项：1.薄层色谱分析中为使斑点集小，点样应分次点加，每次点加后，俟其H然T•燥、低温烘干或经温热气流吹干。2.薄层板放入层析缸时，薄板底边应水平浸入展开剂中，待展开至溶剂前沿距玻板顶端2〜3cm时，取出薄层板。3.展开缸必须密封，为使缸内展开剂饱和，薄层板放入询可在层析缸内壁贴滤纸条，II：滤纸条一端浸入展开剂中，密封层析缸，待系统平衡后再将薄层板放入，展开。4.HPLC测定中流动相使用前必须经过滤膜过滤和超声脱气。5.HPLC测定完毕后，必须用水冲洗系统30分钟以上

7、，然后再用甲醇冲洗。更换流动相时必须先停泵，待压力降至零时，将滤头提出液面，置期一流动相溶液中。实验报告：实验结束后，书写实验报告。实验指导要点：1.粘合薄层板的制备，根据玻板的人小，取一定量固定相，按比例加适量粘合剂（或水）研磨均匀，去除气泡，倒在玻板上，充分震荡，使成一均匀薄层。置水平位置晾干，110°CT燥30分钟，置干燥器内备用，注意保存吋勿使薄层表而损伤。使用而检查表而光洁、均匀程度。2.点样斑点要集中，应分次点样，待前一滴干后再点第二滴，对照与样品应点在同一水平位置上，距底边2.0cm,距薄层边约1.5cm。两斑点间距约1.5cm。3.展开剂

8、量不宜太多，以不浸没样点为宜。展开距离为10〜15cm,使溶剂前沿距薄层顶边约2