hplc法检查甲睾酮片的有关物质

《hplc法检查甲睾酮片的有关物质》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、HPLC法检查甲睾酮片的有关物质吴孟岚杨进（黔东南州食品药品检验检测中心；贵州凯里556000）摘要：目的探讨甲睾酮片有关物质检查方法。方法采用采用高效液相色谱（HPLC）法，色谱柱为C18柱（150mm×4.6mm,5μmh以甲醇-水（68:32）为流动相;检测波讼288nm;柱温30°C;流速1.0ml?min-l。结果在选定的色谱条件下，主成分与有关物质能完全分离，各杂质峰分离良好。结论该方法专属性强、灵敏度高、重复性好，可用于检查甲睾酮片的有关物质。关键词：甲睾酮片有关物质高效液相色谱法甲睾酮为人工合成的留类激素，具有促进男性性器官及副性征的发育成熟、

2、对抗雌激素和促进蛋白质合成与骨质形成等作用，化学名称为17α-甲基-17β-姪基雄阐-4-娣-3-酮。甲睾酮片近几年来临床无不良反应的报道，但通过检索文献发现服用甲睾酮片有过敏反应的情况，而且17-&alPha;-烷基类的激素一般都有肝损伤。为有效控制产品质量，对其有可能存在的杂质进行研究，考察甲睾酮片的有关物质。1实验部分1.1仪器与试药高效液相色谱仪（日木岛津SIL-20A）,甲睾酮对照品（100172-200503,中国药品生物制品检定所），甲睾酮片，甲醇为色谱纯，水为超纯水，其余试剂为分析纯。1.2方法与结果1.2.1色谱条件与系统适应性试验十八烷

3、基硅烷键合硅胶为填充剂；以甲醇-水（68:32）为流动相；检测波长为288nm;理论塔板数按甲睾酮计不低于1500,甲睾酮峰与相邻峰的分离度均符合要求。1.2.2溶液的制备取甲睾酮片10片，研细，加甲醇溶解并稀释制成每lml中约含0.6mg的溶液，滤过，取续滤液作为供试品溶液；精密量取供试品溶液2ml,置100ml量瓶中，用甲醇稀释至刻度，作为对照溶液。取不含甲睾酮的空白对照适量，按供试品制备方法制成阴性对照溶液。1.2.3专属性在“1.2.1”项的色谱条件下，精密量取甲睾酮对照品溶液、空白对照溶液、供试品溶液各10μl,分别进样，记录色谱图。由图1可知，原料药杂质峰、辅

4、料峰、主成分峰均能完全分离，辅料无干扰。图1阴性对照溶液（A）、甲睾酮对照品溶液（B）、供试品溶液（C）精密量取2ml供试品溶液4份，分别进行如下操作:加5ml甲酸溶液，在100°C水浴中加热50min;加5ml氨水，在60°C水浴中加热30min;加5ml30%过氧化氢溶液，在100°C水浴中加热50min;在100°C烘箱中加热8h。将以上各破坏样品稀释制成0.6mg?ml-l的降解溶液。照“1.2.1”项下的色谱条件，精密量取10μl上述降解溶液，分别进样，记录色谱图。由图2可知，各破坏试验产生的降解产物峰均能与主成份峰完全分离。图2供试品未破坏（A）、酸破坏（B）

5、、碱破坏（C）、氧化破坏（D）、高温破坏（E）1.2.4检测限与耐用性试验取供试品溶液，用甲醇稀释成系列浓度，进样，当S/N=3时，测得检测限为0.06ng[2]。在“1.2.1”项色谱条件的基础上，对流动相的组成、流速、柱温、同类型不同品牌的色谱柱进行耐用性试验。结果表明，当系统条件发生微小变动吋，测定结果不受影响。说明本法的耐用性良好，符合测定要求。1.2.5有关物质的测定照“1.2.1”项下的色谱条件，取10μl对照品溶液进样，调节检测灵敏度，使主成分色谱峰的峰高约为满量程的20%,精密量取供试品溶液与对照溶液各10&mU;l,分别进样，记录色谱图至主成分峰保留时间

6、的3倍。供试品溶液色谱图中如有杂质峰，单个杂质峰面积不得大于对照溶液主峰面积（2.0%）,各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积的1.5倍（3.0%）。供试品溶液色谱图中任何小于对照溶液主峰面积的0.025倍的峰可忽略不计。对34批样品的冇关物质进行了检查，结果见表1。表丄甲睾酮片有关物质检验结果2讨论2.1试验中用LC-MS-MS分析了甲睾酮片中的杂质，通过LC-MS-MS对甲睾酮片及原、辅料的研究发现其奋m/z301.4的杂峰，用DAD对原、辅料进行分析，辅料在241nm波长下对杂质测定存在干扰，m/z301.4的杂峰在288nm处冇最人吸收且辅料干扰较弱。故HPLC的检

7、测波长确定为288nm。2.2《中国药典》2015年版二部甲睾酮原料药有关物质的方法中流动相为甲醇-水（72:28）[1],该流动相比例m/z301.4的杂峰无法与甲睾酮主峰达到很好的分离，经过试验分析将流动相比例改为甲醇-水（68:32）,能有效分离m/z301.4的杂峰。故HPLC的流动相比例确定为甲醇-水（68:32）。2.3破坏结果表明，甲睾酮对酸、氧化等因素较稳定;对碱、热等因素较敏感。参考文献[1】中华人民共和国国家药典委员会.中国药典[S].二部.北京:中国医药科技出版社,20