【精品】山羊痘的分离与鉴定

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1、中英文摘耍1综述2一.病原学2—.流行特点2三•症状类型2四•临床症状以及病理剖检变化3五•组织学检查3正文41•病例背景41.1病变图片42.实验室试验52」实验材料52.2实验方法5221病料处理52.2.2病毒培养62.2.3电镜观察6224病毒滴度测定62.2.5琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验62.2.5」AGID抗原制备62.2.5.2琼脂平板的制备62.2.5.3制备抗原的特异性测定62.3结果72.3.1细胞培养病变观察72.3.2细胞病变形成特性的观察72.3.3病毒形态的电镜观察82.3.4病毒滴度测定82.3.5琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验93.小结与讨

2、论9致谢10参考文献10山羊痘病毒的分离与鉴定撰写人：谭贤魁指导老师：孟霞甘军纪摘要：本研究从可疑感染病料中分离到一株山羊痘病毒(GTPV)。取山羊痘痂皮和皮肤组织磨碎，加含抗生素的PBS制成1:4的悬液，经离心后，取上清接种veio细胞。每天观察检查细胞病变(CPE),如没有病变，一周盲传一次。盲传2代培养5天后,在vero细胞上观察到明显细胞病变。CPE的病毒特异性通过山羊痘阳性血清的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)证明。当有50%细胞出现CPE时，收获细胞，制备超薄切片，置透射电镜下观察，在vero细胞中观察到不同成熟阶段的病毒粒子，成熟病毒粒子大小约260x320nmo关

3、键词：山羊痘病毒；vero细胞；病毒分离；电镜；鉴定IsolationandIdentificationofGoatPoxvirusAuthor:TanXiankuiAdvisors:MengXiaGanJunjiAbstract:Goatpoxvirus(GTPV)wasisolatedfromskinandscabsamplesthatweresuspectedofbeinginfectedwiththevirus.Skinandcrustedscablesionsweregrindedandphosphatebufferedsaline(PBS)withantibiotic

4、smakingupa1:4(w/v)solutionwasadded.Thesuspensionswerecentrifugedandthesupernatantsinoculatedintoverocells.Cellcultureswereexamineddailyforthepresenceofcytopathiceffect(CPE),andpassedblindlyonceaweek.CPEwasevidentafter5daysofthesecondblindpassage.ThespecificityoftheCPEwasconfirmedfurtherbythea

5、gargelimmunodiffusion(AGID)withpositiveserumofgoatpoxvirus・When50%CPEwasobserved,cellswereharvestedandmadeultra-thinsections•Undertransmissionelectronmicroscope,numeroustypicalgoatpoxvirusindifferentmaturestageswerefoundinthecytoplasmaoftheinfectedverocells.Thematurevirusparticlesare260by320n

6、m..Keywords:Goatpoxvirus;Verocells;Isolation;electronmicroscopeidentification综述山'C痘病毒(GTPV)为痘病毒科山'C痘病毒属的成员山。该病毒是一种亲上皮性的病毒，大量存在丁病羊的皮肤、黏膜的丘殄、脓疮及痂皮内。鼻黏膜分泌物也含有病毒，发病初期血液屮也有病毒存在。—.病原学GTPV是痘病毒科(Poxviridae)羊痘病毒属(Capripoxvirus)成员之一，其基因组为人小约150kb的线性双股DNA,包括中间编码区和两端反向末端重复序列，共含147个开放阅读框(ORF)。从实验上表明山羊痘病毒地

7、方流行毒株在DNA分子结构上已发生了某些细微的变化，如碱基突变等。这些酶切图谱的差异是否与山羊痘病毒的毒力存在一定的相关性，有待进一步研究⑵。痘病毒对热的抵抗力不强，55°C20分钟或37°C24小时均可使病毒灭活；病毒对寒冷及干燥的抵抗力较强，冻干的至少可保存3个月以上；在毛中保持活力达2个刀，在开放羊栏屮达6个月⑶。二•流行特点潜伏期平均为6〜8天。羊痘广泛流行于养羊地区，传播快，发病率高。不同品种、性别和年龄的羊均可感染，但细毛羊较粗毛羊、羔羊较成年羊有更高的易感性，病情亦