山羊痘的分离与鉴定

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1、中英文摘要综述四五正文病原学流行特点症状类型临床症状以及病理剖检变化组织学检查••••••••2223••••••••341.病例背景41」病变图片42.实验室试验2.1实验材料52.2实验方法52.2.1病料处理52.2.2病毒培养62.2.3电镜观察6224病毒滴度测定62.2.5琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验62.2.5.1AGID抗原希【J备62.2.5.2琼脂平板的制备62.2.5.3制备抗原的特异性测定62.3结果72.3.1细胞培养病变观察72.3.2细胞病变形成特性的观察72.3.3

2、扌目：丿IZ'IJ2.3.4病毒滴度测定82.3.5琼脂凝胶免疫扩散(AGID)试验93.小结与讨论910••••••••••1致谢参考文献山羊痘病毒的分离与鉴定撰写人：谭贤魁指导老师：孟霞甘军纪摘要：本研究从可疑感染病料中分离到一株山羊痘病毒(GTPV)o取山羊痘痂皮和皮肤组织磨碎，加含抗生素的PBS制成1:4的悬液，经离心后，取上清接种vero细胞。每天观察检查细胞病变(CPE),如没有病变，一周盲传一次。盲传2代培养5天后，在vero细胞上观察到明显细胞病变。CPE的病毒特异性通过山羊痘阳性血清

3、的琼脂凝胶免疫扩散试验(AGID)证明。当有50%细胞出现CPE时，收获细胞，制备超薄切片，置透射电镜下观察，在vero细胞中观察到不同成熟阶段的病毒粒子，成熟病毒粒子大小约260X320nmo关键词：山羊痘病毒；vero细胞；病毒分离；电镜；鉴定IsolationandIdentificationofGoatPoxvirusAuthor:TanXiankuiAdvisors:MengXiaGanJunjiAbstract:Goatpoxvirus(GTPV)wasisolatedfromskinan

4、dscabsamplesthatweresuspectedofbeinginfectedwiththevirus.Skinandcrustedscablesionsweregrindedandphosphatebufleredsaline(PBS)withantibioticsmakingupa1:4(w/v)solutionwasadded.Thesuspensionswerecentrifugedandthesupernatantsinoculatedintoverocells・Cellcultu

5、reswereexamineddailyforthepresenceofcytopathiceffect(CPE),andpassedblindlyonceaweek.CPEwasevidentafter5daysofthesecondblindpassage.ThespecificityoftheCPEwasconfirmedfurtherbytheagargelimmunodiffusion(AGID)withpositiveserumofgoatpoxvirus・When50%CPEwasobs

6、erved,cellswereharvestedandmadeultra-thinsections.Undertransmissionelectronmicroscope,numeroustypicalgoatpoxvimsindifferentmaturestageswerefoundinthecytoplasmaoftheinfectedverocells.Thematurevirusparticlesare260by320nm..Keywords:Goatpoxvirus;Verocells;I

7、solation;electronmicroscopeidentification综述山羊痘病毒(GTPV)为痘病毒科山羊痘病毒属的成员⑴。该病毒是一种亲上皮性的病毒，大量存在于病羊的皮肤、黏膜的丘疹、脓疮及痂皮内。鼻黏膜分泌物也含有病毒，发病初期血液中也有病毒存在。—•病原学GTPV是痘病毒科(Poxviridae)羊痘病毒属(Capiipoxvirus)成员之一，其基因组为大小约150kb的线性双股DNA,包括中间编码区和两端反向末端重复序列，共含147个开放阅读框(ORF)o从实验上表明山羊痘病

8、毒地方流行毒株在DNA分子结构上已发生了某些细微的变化，如碱基突变等。这些酶切图谱的差异是否与山羊痘病毒的毒力存在一定的相关性，有待进一步研究⑵。痘病毒对热的抵抗力不强，55°C20分钟或37°C24小吋均可使病毒灭活；病毒对寒冷及干燥的抵抗力较强，冻干的至少可保存3个月以上;在毛中保持活力达2个月，在开放羊栏中达6个月⑶。二•流彳丁特点潜伏期平均为6〜8天。羊痘广泛流行于养羊地区，传播快，发病率高。不同品种、性别和年龄的羊均可感染，但细毛羊较粗毛羊、羔