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《痰瘀证血清蛋白质指纹图谱临床探究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在工程资料-天天文库。
1、痰瘀证血清蛋白质指纹图谱临床探究【摘要】[目的]分析痰瘀证患者血清蛋白质指纹图谱，探讨痰瘀证患者血清多肽蛋白表达的差异性。[方法]应用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDITOFMS)及弱阳离子交换蛋白质芯片(weakcationicexchangerproteinchip)技术检测14例痰瘀证患者和16例性别、年龄匹配的正常对照组血清，获得血清蛋白质指纹图谱。[结果]痰瘀证组与正常对照组之间检测到18种差异蛋白(P<；0.05)o[结论]痰瘀证患者血清中存在一些差异表达蛋白质。【关键词】痰瘀证；蛋白质；指纹图谱Abstr
2、act：[Objective]Toobservetheserumalbuminfingerprintspectrumofsputumstasissyndromeandexplorethedisparityofitspolypeptidealbuminexpressions.[Method]ApplySELDITOFMSandweakcationicexchangerproteinchiptotest14casesand16normalpersons?serumforfingerprintspectrum・[ResuIt]There?r
3、e18kindsofdisparityalbuminbetweenpatientsandnormalpersons.[Conclusion]Sputumstasispatientshavesomedifferentexpressedalbumininserum.Keywords:sputumstasissyndrome；albumin；fingerprintspectrum所谓“证”，是指在疾病发展过程中，某一阶段的病理概括。它包括病的原因（如风寒、瘀血、痰饮等等）、病的部位（如表、里、某脏、某腑等等）、病的性质（如寒、热等等），反映
4、了疾病过程中该阶段病理变化的全面情况。笔者应用SELDITOFMS及蛋白质芯片技术从蛋白质指纹图谱角度探讨痰瘀证本质及发病机制。1资料与方法1.1临床资料14例为2008年1月至2008年12月浙江省人民医院中医科门诊病人，诊断标准根据《中医诊断学》中关于痰证和瘀证的诊断标准拟定，主要以舌象的舌质紫暗、舌苔滑腻和脉象的脉涩为诊断依据。其中男13例，女1例；年龄25〜69岁，平均（47）岁。选择16例正常健康人为对照组，其中男15例，女1例；年龄28〜65岁，平均（46.5）岁。2组年龄、性别等资料经统计学处理无显著性差异，具有可比性。
5、1.2材料和方法（1）材料：尿素、乙睛、三氟乙酸、TrisHC1pH9.0.CHAPS、DTT、NaAc、HPLCH20和sinapinicacid（SPA）等均购自Sigma公司。(2)方法：①血清标本处理：14例痰瘀证患者和16例正常健康人各空腹采集静脉血3ml,采集后立即于4°C低温冰箱静置2h,4°C,4000r/min离心lOmin分离血清，将血清于4°C,12000r/min再次离心5min,去除所有残留细胞碎片和不溶物，在冰上将血清分装为每管looui,保存于-8(rc冰箱。实验检测血清均仅一次冻融。从-801冰箱中取出
6、血清样品，于QC,10000r/min,离心5min；取血清10ul,加入20u1U9缓冲液(9MUrea,2%CHAPS,50mMTrisHC1,pH9.0)稀释，而后，将以上标本冰浴振荡30min,400r/min；将30u1上述变性后标本加入360u1相应的结合缓冲液混匀，待用。所有样本均进行双份检测以减少实验误差。②WCX2操作简要步骤：将200P1结合缓冲液(50mMNaAc,Ph4.0)加至已装好WCX2的Bioprocessor(美国Ciphergen公司)中，置振荡器(MSIMinishaker)400〜600r/mi
7、n震荡5min,甩掉缓冲液。重复上述操作两次。在芯片处理器每孔中加入100卩1处理好的标本，置振荡器400〜600r/min,4*震荡lh；甩出标本。每孔加入200U1结合缓冲液，室温置振荡器400〜600r/min,震荡5min,甩去孔中液体，再次加入结合缓冲液200P1,重复操作一次。立刻拆开芯片处理器，取出芯片，待干后，在每个加样孔上加SPAO.5U1,干燥后再重复加SPAO.5u1一次，然后用蛋白质指纹图谱仪(SELDITOFMS,美国Ciphergen公司)阅读芯片。③蛋白质指纹图谱的测定参数和标化：在读取数据前，用加有al
8、linone标准蛋白质的NP20芯片校正质谱仪，使分子误差<；0.1%O本研究中阅读仪的主要参数设定：最佳激光强度240,最佳检测灵敏度8；设最高检测分子质量为50Da,最佳状态从IDa到15000Da；蛋白质指纹图
