肾移植术后巨细胞病毒感染的实验室诊断进展

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1、肾移植术后巨细胞病毒感染的实验室诊断进展托娅陈松楠张春媛(河北省秦皇岛市北京军区北戴河281医院，066100)巨细胞病毒(cytomegalovirus,CMV)也称为细胞包涵体病毒，它属于疱疹病毒的B亚科，由于感染后的细胞变得肿大，具有巨大的核内包涵体，因此被称为巨细胞病毒。作为疱疹病毒科屮最大的病毒，它具冇严格的种屈特异性，人是CMV的唯一宿主。CMV具冇潜伏一活化的特性,当巨细胞病毒感染人体后会潜伏于体内，对于免疫力止常的个体它并不具有明显毒力，但当机体免疫功能低下时，防御CMV感染的能力也随之降低，潜伏的CMV就会复制加快

2、，从而引发显性感染"、役肾移植术后的患者由于终身服用免疫抑制剂，机体免疫力处于减低状态，因此容易感染巨细胞病毒，或者体内潜伏的巨细胞病毒乂处于活动状态，从而导致CMV肺炎、CMV肠炎、CMV肝炎等组织器官病变，并与移植物急性排斥和慢性排斥冇关。CMV感染在临床上被认为是导致器官移植失败的重要原因Z—区但由于CMV感染的临床表现常常缺乏特异性，因此实验室检杳对于早期诊断与治疗冇重要参考价值，临床始终在研究、改进CMV的检测方法，以期能快速、准确地早期诊断HCMV感染.1病毒分离培养法1.1早期传统的病毒培养方法向来被认为是CMV实验室

3、诊断的金标准，它是将标本(尿液、唾液、血沉棕黄色层等)接种到单层人胚肺纤维母细胞上，利用CMV引起细胞毒效应来观察细胞病理学变化。这种方法的优点在于灵敏度和特异度较高，但曲于CMV在细胞中的增殖速度非常缓慢，同吋操作复杂，条件要求高，而且检测材料屮病毒生长抑制物会对检测有较大的影响，因此并不适用于临床早期、快速诊断。1.2快速早期病毒壳脱落离心培养方法和快速增强组织培养免疫荧光技术方法(rapidenhancedtissuecultureimmunofluorcsccnsc,RET-CIF)由传统病毒培养方法的基础上发展而来。这两种

4、方法与传统病毒分离法比较，在特异性、敏感性以及缩短检测吋间方面都有了较犬提高，并且可以进行病毒定量。其屮快速早期病毒壳脱落离心培养方法被认为是CMV感染的确认实验。但是这两种方法的检测时间仍然较快速早期病毒壳脱落离心培养方法需要培养16〜36h、RET-CIE需耍2d后才能进行结果检测分析，同时操作方法仍然比较复杂，因此使病毒分离培养方法的临床实际应用价值受到限制，而更多的是用于科研⑸。2、血清学特异性抗体检测2.1病毒血清学诊断方法它包括补体结合实验、间接血凝实验、免疫荧光实验、酶免实验和放射免疫实验，临床最常用的是酶联免疫吸附法

5、(ELASA)检测CMV-IgG和1妙1抗体。ELASA方法的优点在于操作比较简便，只需要酶标仪即可，检测时间短，适合大样本检测。通常认为CMV-IgG只能代表既往感染，只有滴度升高4倍才有意义，而CMV-IgM阳性表示患者有近期活动性感染。由于机体感染CMV后抗体出现时间晚，当出现IgM阳性时，有的患者IgM会慢慢消失，冇的患者IgM消除时间很长，对于严重免疫抑制患者可缺乏抗体反应或抗体延迟出现，因此并不适用于感染早期的诊断。临床更倾向于将ELASA方法用于移植前供、受者的筛查。但两者中的任何一种都不能单独用作移植前的筛查，因为I

6、gM假阳性能够大大降低筛查的特异性［61o2.2Western印迹法此法检测CMVIgM较ELASA法具冇更高的特异度。它将凝胶电泳和免疫同相检出法相结合，利用生物分了亲和技术进行测定，但此法同样存在操作复杂、检测时间长的缺点，尽管它与病毒学检测结果有很好的一致性，但仍然不能满足临床早期诊断的需要。冇报道⑶称IgM抗体诊断HCMV感染的敏感性仅为42.9%,特界度为78.3%,而且IgM抗体是否转阳以及转阳的时间和临床症状之间无明显相关性。这些无疑也会限制CMU抗体检测对于临床诊断的参考价值。2.3CMV-IgG抗体亲和力检测由于I

7、gG和IgM抗体对于临床诊断的局限性，国内外有学者将CMV-TgG抗体亲和力的方法应用于CMV感染的研究中。采用ELASA.电化学发光免疫分析法等方法检测CMV-IgG抗体亲和力，认为初次感染吋常产生低亲合力抗体，表示感染发生在3〜5个月内；再次感染表现为高亲合力抗体，表示感染发生在儿个刀或儿年之前。高亲合力抗体、I妙I阳性的患者可能是既往感染CMV、病毒屈于非活化的IgM抗体持续存在，或是CMV再感染产生的IgM抗体。利用这种方法，同时结合临床症状來判断是否为CMV原发感染、复活或持续感染［7-111,可以辅助CMV的诊断。3、抗

8、原血症的检测抗原血症指机体感染CMU后，在外周血口细胞中可以检测到C1V抗原。抗原血症检测是器官移植CMV感染诊断的重耍进步，pp65是CMV感染时外周血白细胞屮的主要抗原，在病毒感染早期就会出现，在整个感染周期持续表达，因此被认为