人巨细胞病毒感染的实验室检测与诊断

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1、万方数据震弼儿射临番客刍第27卷第10彤]2012年5月JApplClinPediatr．I／01．27No．10．May2012DOI：10．3969／j．issn．1003-515X．2012．10．001。’人巨细胞病毒感染的实验室检测与诊断阮强，何蓉(中国医科大学附属盛京医院病毒研究室，沈阳110004)·729··幸家论坛·LaboratoryDetectionandDiagnosisofHumanCytomegalovirusInfectionRUAN()缸，lg，tie舶昭(ViresLaboratory，Shen舀ingHospita

2、lAffiliatedtoChinaMedicalUniversity，Shenyang110004，LiaoningProvince，China)摘要：人巨细胞病毒(HCMV)是儿童先天性感染和出生后获得性感染的莺要病原，可引起多种急、慢性感染和神经系统迟发后遗症。早期、准确诊断HCMV感染意义重大，但仅依靠临床表现难以对HCMV感染做出明确诊断。现简要介绍HCMV感染的实验室检测及诊断新技术。实用儿科锰床杂志。2012。27Ilo)：729—731关键词：人巨细胞病毒；感染；实验室检测；诊断中图分类号：R729文献标识码：A文章编号：1003—5

3、15X12012)10-0729-03人巨细胞病毒(HCMV)属于疱疹病毒口亚科，含线状双链DNA分子，长度为220—240kb¨o，在形态、基因结构上与其他疱疹病毒相似。HCMV可长期或间歇地从患者或隐性感染者的唾液、精液、尿液、乳液和子宫颈分泌物中排出病毒。HCMV感染在我国流行广泛，且首次感染多发生于婴幼儿时期。HCMV一旦侵入人体，将长期或终身存在于体内，在绝大多数免疫正常个体，常表现为无症状感染；但在免疫抑制个体、胎儿和小婴儿可出现明显症状。HCMV感染的靶器官与宿主年龄密切相关，中枢神经系统损害和各种先天畸形仅见于先天性宫内感染的胎儿，婴

4、幼儿感染以肝炎、肺炎多见，而较大儿童多无症状。由于HCMV感染缺少典型的临床症状，仅靠临床表现不能明确HCMV感染的诊断。为了能早期、快速而准确地诊断HCMV感染，及时给予治疗，以便降低疾病的危害性和病死率，现简要介绍HCMV感染实验室检测技术及其实验室检测结果对诊断的意义。1HCMV感染实验室检测技术及对诊断的意义1．1病毒学检测病毒分离足HCMV感染实验室诊断的金标准，可作为活动性感染的诊断指标之一。传统的试管培养法是将血，尿、唾液、羊水、脑脊液、支气管肺泡灌洗液等待检标本接种到人胚肺成纤维细胞等敏感细胞上进行培养，病毒的生长繁殖可导致感染细胞出

5、现典型的细胞肜态改变，即细胞病变效应。HCMV在人胚肺成纤维细胞上出现典型细胞病变一般需要l一3周，阳性结果需要进行免疫学等方法的鉴定。做出HCMV病毒分离阴性诊断需要至少4周以上，必要时还需要进行肓传。病毒分离足检测具有复制活性的病毒，需要准确采集病作者简介：阮强．男．研究员。教授．博上生导师．中华医学会医学病毒学分会副主任蚕员．先后主持完成1日家级、省部级研究课题10多项．参与困家“八无”和“九五”攻关项日2项，近5a来．主持完成1日家自然科学基金课题3项，主持承．ffjl日家自然科学基金课胚I项。指导进行囡家自然科学堆金课题5项，发表柞

6、j∈论

7、文100余篇，研究疗向为人巨细胞病檬感染致痫机制的分子基础，电了信箱ruanq@sj—hospital．org。毒含量高的组织标本，并保汪低温快速运送标本。病毒分离阳性具有病毒感染的确切诊断意义，但由于标本采集、运送、细胞状态与敏感性以及实验操作等原因，假阴性结果常不能完全避免。由于HCMV增殖很慢，传统的试管培养法进行病毒分离达不到早期快速检测的目的。改良的快速病毒培养方法足将检测标本离心后接种到生长在飞片(eovere]ip)上的单层细胞培养16—36h，然后用HCMV即刻早期蛋白IE72的单克隆抗体进行免疫荧光实验或酶免疫实验，检测细胞中的病毒

8、即刻早期蛋白，阳性细胞胞核内着色。因为tlCMV即刻早期蛋白1E72是在病毒复制早期产生的病毒蛋白，所以IE72是病毒复制的诊断指标。该法与传统方法比较具有检测时问短和敏感性高的优点，故常用作HCMV感染的确认实验。Alexander等"1建立了一种新的微量病毒检测技术，将快速组织培养与免疫荧光技术结合，把人胚肺成纤维细胞培养于96孔微板中，并向其中加入处理过的单克隆抗体，接种后3d即检出结果。该方法适合大量临床标本的检测。并具有省时的特点。1．2病毒抗原学检测pp65抗原血症检测法：pr,65是HCMV表达的一种晚期蛋白，是HCMV活动性感染的早期

9、标志性产物【3】。采用pp65单克隆抗体通过免疫荧光技术或流式细胞技术对患者自细胞中pp65抗原进行定性或定