肺炎链球菌毒力相关基因检测及临床意义

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1、肺炎链球菌毒力相关基因检测及临床意义摘要：目的：检测肺炎链球菌临床分离株毒力基因存在情况。方法：以临床分离出的91株肺炎链球菌作为研究对象，利用PCR法对肺炎链球菌5种毒力基因实施检测。结果：在全部的91株肺炎链球菌中LytA、PsaA、NanA、PspA、Ply这5种基因的检测阳性率分别为94.5%、85.7%、85.7%、61.5%.82.4%o结论：肺炎链球菌毒力因子是肺炎链球菌致病的基础，5种常见的毒力基因在肺炎链球菌检测中，其阳性率都比较高，此实验为进一步阐明毒力因子的作用机制并应用于指导抗肺炎链球菌新药和新型疫苗研制奠定了一定的基础。关键词：肺炎链球菌；毒力基因；疫苗肺炎

2、链球菌(Streptococcuspneumoniae,S.pn)的致死率较高，由于其具有多重耐药菌，临床治疗始终很难攻克这一道难关。因此，只有不断的进行深入研究，探讨其毒力基因的发病机制及存在情况，从而开发出更加完善的抗病疫苗。笔者对临床分离出的91株肺炎链球菌作为研究对象,现将取得的试验进展报告如下。1资料与方法1.1一般资料：选取2007年3月〜2012年4月临床分离出的91株肺炎链球菌，其中痰培养75株，血培养10株，分泌物培养4株，脑脊液培养2株。1.2检测方法：采用PCR法进行毒力基因的检测，PCR产物都要经过百分之一琼脂糖凝胶电泳，然后再使用Bio-Rad紫外凝胶成像分

3、析仪进行检测，对检测到的阳性率分别进行记录以及分析。2结果在全部的91株肺炎链球菌中LytA、PsaA、NanA、PspA、Ply这5种基因的检测阳性率分别为94.5%.85.7%.85.7%,61.5%,82.4%O详见表1o检测结果见图1~5。毕业论文表15种常见毒力基因检测结果情况[株(％)]血清型/群(株)LytA(+)PsaA(+)NanA(+)PspA(+)Ply(+)19(35)35(100)30(85.7)33(94.3)28(80.0)论文代写33(91.4)6(6)毕业论文6(100)5(83.3)6(100)4(66.7)论文代写5(83.3)10(6)6(10

4、0)5(83.3)论文代写5(83.3)4(66.7)5(83.3)论文代写15(5)论文代写5(100)5(100)3(60.0)1(20.0)论文代写5(100)23(4)4(100)3(100)4(100)1(50.0)2(50.0)5(4)4(100)3(75.0)3(75.0)毕业论文2(50.0)1(25.0)其他型(19)论文代写17(89.5)论文代写17(89.5)15(78.9)论文代写11(57.9)毕业论文15(78.9)未分型(12)9(75.0)8(66.7)9(75.0)2(33.3)9(75.0)总型(91)86(94.5)78(85.7)78(85.

5、7)56(61.5)75(82.4)论文代写图1LytA基因片段的PCR产物（308bp）图2PsaA基因片段PCR产物（839〜930bp）毕业论文图3NanA基因片段PCR产物（500bp）图4PspA基因片段PCR产物(1200-1800bp)图5Ply基因片段PCR产物(329bp)3讨论抗S.pn感染的候选蛋白疫苗的主要是其毒力因子，如肺炎球菌溶血素(Pneumolysin,Ply),S.pn表面蛋白A(PneumococealsurfaceproteinA,PspA),S.pn表面黏附素A(PneumococcalsurfacaadhesinA,PsaA自溶素(Auto

6、lysin,Lyt)等,有这些蛋白质的独立或联合疫苗在S.pn感染疾病的发病机制中起到了重要的作用⑴。因此，了解S.pn毒力因子的存在情况及致病机制对有助于对疫苗的研究。Lyt在正常情况是无活性的，当S.pn菌体细胞壁合成停止或营养不足或抗生素处理时，Lyt便从LTA上分离，作用于细胞壁的N■乙酰胞壁酸和丙氨酸之间的共价键水解CW为糖链和肽链，导致细胞溶解［2］。NanA可分解细胞表面或体液中的多糖、糖蛋白、低聚糖上的唾液酸残基，暴露宿主细胞表面的S.pn黏附受体，从而促进细菌的黏附［3］。PsaA是各型S.pn共有的一种遗传保守的、种特异性的表面蛋白抗原，具有较好的免疫原性，在S.

7、pn黏附呼吸道黏膜过程中起关键作用，可用于S.pn疾病的免疫诊断⑷。PspA是S.pn重要的毒力因子，其主要作用是与乳铁蛋白结合使其丧失功能并抑制补体活化，降低C3b在S.pn表面的沉淀从而干扰补体介导的吞噬调理作用，而吞噬调理作用被认为是宿主清除S.pn最主要的途径［5］。Ply是一种胞内蛋白，分子量52kDa，属于胆固醇结合毒素类，Ply可与细胞膜表面的胆固结合，插入脂质双分子层，然后通过蛋白质的寡聚化作用形成跨膜孔，使细胞溶解⑹。本组以肺炎链球菌作为