肺炎链球菌pbps基因突变与青霉素耐药相关性及毒力因子研究

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1、温州医学院硕士学位论文肺炎链球菌PBPs基因突变与青霉素耐药相关性及毒力因子研究姓名：屠鸿翔申请学位级别：硕士专业：临床检验诊断学指导教师：周铁丽2012-12温州I医学院硕士学位论文肺炎链球菌PBPs基因突变与青霉素耐药相关性及毒力因子研究中文摘要目的收集温州医学院附属第一医院和温州市中西医结合医院2010年9月"、'2012年3月临床标本中分离的肺炎链球菌，分析其临床分布情况；微量肉汤稀释法检测肺炎链球菌临床常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MinimalInhibitoryConcentrati

2、on，MIC)；聚合酶链式反应(PCR)检测青霉素耐药菌株pbpla币Hpbp2b、pbp2x基因的突变和所有菌株毒力因子；分析青霉素结合蛋白氨基酸组成的改变，讨论与青霉素耐药性的关系。通过肺炎链球菌的临床感染现状、毒力情况，耐药机制的研究分析，为临床治疗、医院内感染监控和预防免疫提供依据。方法1．收集2010年9月"-一2012年3月从温州医学院附属第一医院和温州市中西医结合医院的痰液、血液、脑脊液、脓液等各类标本中分离的肺炎链球菌(Streptococcuspneumoniae)菌株72株，

3、保存复活后，采用微量肉汤稀释法检测青霉素(penicillin)、四环素(tetracycline)、红霉素(erythrocin)、左氧氟沙星(1avo．ofloxacin)、头孢噻肟(cefotaxime)的MIC值。2．用聚合酶链式反应(PCR)法对青霉素耐药菌株pbpla和pbp2b、pbp2x基因进行扩增，扩增产物进行DNA测序。3．用聚合酶链式反应(PCR)法对所有肺炎链球菌进行毒力因子检测。结果1．肺炎链球菌主要来源于痰液标本，共68株，占94．4％，其他来源包括脓液标本1株，脑脊

4、液标本1株，血液标本2株；从患者来源看，62株分离自儿童患者标本，分别为支气管肺炎(20例)、肺炎(19例)、毛细支气管炎(5例)、麻疹(4例)等患者，以呼吸道疾病为主，且病种较为集中。10株分离自成人患者标本，疾病种类多样，且分散在个科室。2．临床分离株的肺炎链球菌对四环素、红霉素的敏感率已很低，分别为8．3％和2．8％)，左氧氟沙星仍保持高敏感率，达98．6％，头孢噻肟的敏感率为44．4％，对青霉素的敏感率为30．6％，72株菌中青霉素耐药株14株。学龄前和学龄后年龄组中分离的菌株对青霉素的

5、敏感性存在差异。3．PBPla氨基酸序列改变：14株青霉素耐药株中，13株菌在STMK区域有4温州医学院硕士学位论文T371S替换；11株菌在SRNVP区域有P432T替换，1株菌在SRNVP区域有P432S替换。4．PBP2b氨基酸序列改变：14株菌SSNT区域均有T446A替换。5．PBP2x氨基酸序列改变：14株菌STMK区域有T338A替换、LKSGT区域有L546V替换。其中8株菌STMK区域中还包含M339F替换，即为T338A／M339F两位点变异。6．毒力因子的检测结果：72株肺

6、炎链球中毒力因子LytA、Ply、PspA、PsaA和nanA阳性的菌株分别为70株(97．2％)、70株(97．2％)、8株(11．1％)、16株(22．2％)和72株(100％)。结论1．肺炎链球菌的临床分离菌株主要来源于儿童，大多引起呼吸道相关感染；成年患者中肺炎链球菌的标本分布来源呈多样性。符合肺炎链球菌致病特点、社区流行性特点。2．药物敏感试验显示，四环素、红霉素耐药率已很高；左氧氟沙星虽然具有较高的敏感性，但由于其在儿童中的副作用，限制了其临床应用；作为治疗肺炎链球菌感染的传统药物青

7、霉素，耐药率已接近了70％，需引起关注。3．从青霉素耐药菌株的PBPs上3个氨基酸保守功能片段检测到了相关突变。突变位点能够降低PBPs和p．内酰胺类抗生素的亲和力，可以解释与青霉素耐药的相关性。4．临床肺炎链球菌携带多种毒力因子基因，了解了毒力因子的分布情况，为进一步研究和研制疫苗积累了辅助资料。关键词肺炎链球菌；耐药性；青霉素结合蛋白；毒力因子温州医学院硕士学位论文TheCharacterizationofPBPsMutationsofPenicillin．ResistantStreptoc

8、occusPneumoniaeandStreptococcusPneumoniaeVirulenceFactorsAbstractObjectivesToresearchthestrainsofStreptococcuspneumoniaewhichisolatedfromthefirstaffiliatedhospitalofWenzhoumedicalcollegeandWenzhouCityofIntegrativeMedicineHospital．Theminimalinhibitory