链霉菌产生的新型纤溶酶的纤溶性质和溶栓作用

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1、药学学报ActaPharmaceuticaSca19M8r33(7)481~485•481•/7幷jj/d、［那〃链霉畲产星的新型纤溶酶的纤溶性质和溶栓作用王敏王骏邵明咅「王敏・王以光…TQUb屮£（屮国医学科学院、中国协和浜科大学医药生物技术研究听、生物工程二年，•心血管组，北京100050）冃的怦在进一步确证纤溶活性的眾口簡SW-1的溶栓作用和性质。用休外加熾平板法、试符程块法和存休内甘人鼠前脉血栓洛解及对纤涪因子的作用尊实脸，发现SW1在体外可直搖障解纤维秦白，而无激祜纤溶酶原的作用。在体内，SW-1对大鼠静脉血怜有显著的涪解哉異，与同剂罐尿

2、澈酶的涪栓作用相当、给药（IV）30min后，SW-1引起大觎血浆中幷溶廊、昂溶酶原水军與髙，幻维蚩白原水平下降.而对组织枣幷溶亟原激活剂（tfA）、《2-纠涪酶抑制剂兀显著彫响「提示SWJ是种具有纤溶活性的蛋白酶•而不是纤涪原激活剂.关键词锂專茵；空酶,涪栓；纤犁蛋白原>从云南土壤中淪选到一株可产生纤溶活性物质的链霉菌Y405c从该菌株的96h发酵液中分离纯化到一种具有纤溶活性的蛋白酶SW・1,其分子虽为495X1U-20g（30kDa）r等电点为8.5,有较好的温度稳、迅性和pH億定性（另文发表几为进一步证实其溶栓作用并对其性质进行探讨，本文从体内、体

3、外分别研究了SW-1的纤溶活性、对大鼠静脉血栓的溶解作用及其对血浆中多种纤溶因子的影响.材料与方法动物体重250〜300g,Wisa大鼠，3$兼用，市中国医学科学院实验动物中心提供。药品及试剂SW-1（电泳纯）由本童分离纯化°纤溶系统因子：纤溶腮原（Pig）、纤溶酶（Pkn）、细织型纤溶酶原激活剂（r・PA）、a2纤溶酶抑制剂（％P1〉和纤维蛋白匣（Fbg〉检测试剂盒是上海亚都医学生物技术研究所产品。纤溶酶原（牛血〉、纤维蛋白原（牛血）、愿血酶、尿激酶（杯准品〉是中国药品生物制品检定所产品。冷文于1997年8冃1R收到。••联系人GBSB缓冲液？明胶0.0

4、5%,巴比妥钠0.505%,NhCI0.37%,pH7.75,用于纤溶活性的试管凝块法測定.仪8S血浆中纤溶系统因子的测定使用上海第三分析仪器厂的511型酶标分析仪和754型紫外分光光度rh纤港活性的测定一平板法参照Astrup方法⑴制备纤维蛋白平板（含0.6%琼脂糖,0.36mg*ml"纤维蛋白原和0.2u•ml_1凝血酶），加样后37匸保温16h,测忆溶圈直径，以20〜250u-mr1尿激悔（标准品）作纤溶活件标准曲线C纤涪活性的测定——试晉凝块法⑵在400川GBSB缓冲液中加入150卩1纤维蛋□原（6.6mg-ml*）和待測样品100“37V保温3m

5、in,加入凝血酶（6u-ml-1）和纤溶酶原（1・4u-mE1）的等休积混合物200“37V保温计时・记录所产生擬块变软、滑动、悬浮、成絮状至仝部溶解的时间，SW-1纤涪性质的研究由F市售的纤维蛋白原中混杂有少暈的纤溶酶匝，左这种纤维蛋白平板上■纤涪酶和纤溶酶原徼活剂均可形成溶圈，而无法区分两种作用机制（图lA）c为了对SW-1的纤溶性质进行探讨和推断，我们设计以下两组实验：(1)加热平板法［川】将制备好的纤维蛊门平板在85V加热30mint冷却別室温窃加入待测样品，在37匸保温16h,测定SW-1、SW-1和纤溶酶臣的混介液的活性、并以尿激酶、尿激酶和纤

6、溶酶原的混合液的活性作为对(2)试管凝块法按照纤溶活性的测定——试管凝块法「在反应体系中如入或不加入纤溶酶氐测定凝块溶無时间、以尿橄酶作为对照；改变各试剂及待测样品(2UUu-inl'1)加入顺序，记录凝块是否形成及凝块溶解时间，统计分析各组数克“大風静脉血栓模型的建立将大鼠用戊巴比妥钠(50mg・kg“，叩)麻醉〉分别立颈静脉和颈动脉插管，供给药和取血用〉然后布腹腔静咏的左肾静脉分枝处造狭窄，存其远心端阻断血流，造成长1・5cm的悌脉袋.将土理盐水2.5nd快速注入静脉袋、造成內皮的轻度损伤，恢夏血流、25min£在该篩脉袋处形成血栓vSW-1对大鼠静脉

7、血栓涪解作用的测定将大鼠随机分为3组:生理盐水对照组、尿激酶组和SW-1组。经颈静脉插管给药，给药前及给药后30min分别由颈动脉插伶取血、加入1/1U体凤枸檢酸钠抗凝、末次取血后在原静脉袋两端阻断血流•分离井剪下这段静脉•用生理盐水療注、fit于50X?烘烤，24h行称重「根据各组血栓虐虽的变化，测定SW-1对大鼠静脉血栓的溶解作用。所取3组血样经鬲心后吸取上部血浆,-20V保存待测。纤涪因子的测定按试剂盒说明书，分别用发色底物(&2251)法测定各组血样的Pig、t-PA,Pirn,a2-PI的厝性、用免疫浊度法测定Fbg的含量•统计分析各组数据“1S

8、W-1的体外纤涪作用在平板上SW-1产住清晰的溶圈，由Y板法测碍的