Ⅰ型胶原,提取,组装

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1、东南大学硕士学位论文Ⅰ型胶原的提取及其组装和表征姓名：陆璐申请学位级别：硕士专业：生物科学与医学工程指导教师：钱卫平20060302摘要胶原蛋白，简称胶原，是细胞外基质的主要结构蛋白，是结缔组织的主要成份之一。它广泛存在于动物的皮、骨、肌腱，韧带、血管中，约占哺乳动物总蛋白的l，3。胶原蛋白以其良好的生物相容性、生物可降解性和弱抗原性，在药物释放和组织工程领域得到了广泛地应用。本文是以不同种属的动物皮肤为基本原料，通过酸溶法一醋酸萃取提取了鲨鱼(Carcharodoncarcharias)、牛蛙(Ranaeatesbeiana)、鹌鹑(Coturnixco

2、turnix)、青鱼(Potamalosarichmondia)四种动物的I型胶原。用SDS．聚丙烯酰胺凝胶电泳分析提取的胶原。与标准分子量蛋白比较得到：这四种胶原的肽链组成均为o【1(I)2a2(I)，与I型胶原的肽链组成相一致；分别测量提取的胶原的特征吸收峰，结果显示：这四种胶原的最高吸收峰均在225±5llm，与文献报道的胶原的特征吸收峰位置相符。用考马斯亮蓝染色法测定四种胶原的浓度，结果显示：鲨鱼皮肤胶原的提取率相对最高，鹌鹑皮肤胶原的提取率相对最低。以这四种胶原提取液为母液，使用真空冷冻干燥法，得到相应的胶原海绵。这四种胶原海绵外观相似，色泽白或

3、微黄，质地均匀，结构较为疏松，肉眼可见许多大小不一的孔隙：进一步对其含水量、润湿时囿、吸水量、吸水率等物理性能进行测定，数据表明胶原海绵亲水性好。吸水率较大。用紫外灯照射鲨鱼胶原海绵，促使其胶原分子中酪氨酸和苯丙氨酸的交联，得到的胶原支架材料呈现立体的网状结构。设计使用透析法制备了胶原水凝胶膜，即对饱和的鲨鱼、牛蛙胶原提取液，通过透析、载玻片压平制备成胶原水凝胶膜。与电纺丝法制各纳米级胶原膜相比。此方法简便易行，无需复杂的仪器设备。螺旋测微器测量胶原水凝胶膜的厚度，在饱和状态下得到的鲨鱼胶原水凝胶膜为O．210±0．040mm、牛蛙胶原水凝胶膜为O．070

4、4-0．015mm。对鲨鱼胶原水凝胶膜进行SEM和AFM表征，从SEM图像中能够清楚地看到胶原纤维，彼此紧密交联。每根胶原纤维由相互缠绕的三股螺旋形成；AFM结果显示单根胶原纤维的直径在150～200nm，组成胶原纤维的小片断的直径在100±30nm，与SEM图得到的结果相一致。【关键词】胶原，酸溶萃取，交联，胶原水凝胶膜ABSTRACTCollagenisonemajorstructuralproteinintheextracollularmatrixandalsooneprimarycomponentofknottissues．Itec℃．ountsf

5、orapproximatelyone—thirdofproteinmassinmammalanimalsandCanbefoundinlargequantitiesinskin，bone，tendon,ligamentandbloodvessel．Withitsexcellentbiocompatibility,biodegradabilityandweakantigenicity,collageniswidelyusedinthefieldofdrugdeliveryandtissueengineering．Thisthesisusedanimalski

6、nsbelongingtodifferentcategoriesasbasicrawmaterials．Byusingtheacid·solublemethod。weextractedfouranimals’typelcollagenwhichwerewhitesharkfCareharodoneareharias)，bullfrog(咖eatesbeiana)，commonquail(Coturnixcoturnix)andfreshwaterherring(Potamalosarichmondia)．UsingSDS-PAGEtoanalysisthe

7、fourkindsofcollagenandcomparingwithstandardmolecularprotein，theresultindicatedthatthepeptidechaincompositionsofthefourkindsofcollagenWereallal(I)2a2(I)，whichwereidenticalwiththatoftypeIcollagen．Surveyingthecharacteristicabsorptionpealcrespectively,itshowedthattheyallhadthehighestc

8、haracteristicpeakat225±5nm．Itwasi