猪软骨ⅱ型胶原蛋白的提取纯化与鉴定

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1、第16卷第5期江苏大学学报（医学版）VoI.16No.52006年10月JournaIofJiangsuUniversit（yMedicineEdition）Oct.2006猪软骨!型胶原蛋白的提取纯化与鉴定姜旭淦，陈盛霞，丁建霞，王卉放，马洁，吴亮，许化溪（江苏大学医学技术学院，江苏镇江212001）［摘要］目的：从猪关节软骨中提取纯化!型胶原蛋白，并对其进行鉴定。方法：选择猪关节软骨为提取原料，用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶消化、氯化钠盐析、DE22纤维树脂处理等步骤，提取纯化!型胶原蛋白。采用SDS-PAGE、吸收光谱分析、氨基酸成分分析等方法对!型胶原蛋白进行鉴定。结果

2、：4moI/L盐酸胍能有效去除蛋白多糖；分步加入胃蛋白酶的限制性酶解结果满意；氯化钠盐析浓度为2.4moI/L时最佳。SDS-PAGE电泳结果显示提取纯化的!型胶原蛋白与Sigma公司的产品一致。!型胶原最大吸收峰为230nm，氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨酸含量最高。结论：实验结果提示从猪关节软骨提取的!型胶原蛋白纯度高，符合II型胶原的特征。提取材料广泛、实验条件简便，结果可靠。［关键词］!型胶原蛋白；类风湿性关节炎；软骨；蛋白多糖［中图分类号］R-33［文献标识码］A［文章编号］1671-7783（2006）05-0389-03Studyonisolation，p

3、urificationandidentificationofcollagentype!fromporcinearticularcartilageJIANGXu-gan，CHENSheng-xia，DingJian-xia，WANGHui-fang，MaJie，WULiang，XUHua-xi（SchooIofMedicaITechnoIogy，JiangsuUniversity，ZhenjiangJiangsu212001，China）［Abstract］Objective：ToisoIateandpurifycoIIagentype!（C!）fromporcinearticu

4、IarcartiIageandidentifyitspurity.Methods：TheporcinearticuIarcartiIagewasseIectedasrawmateriaI.Guanidinehydro-chIoridewasusedtoremovetheproteogIycans.Thedigestionofpepsin，saItingofsodiumchIoride，treat-mentwithDEceIIuIosewerestudiedforextractingC!.ThepurityidentificationwasmadebySDS-22PAGE，abs

5、orptionspectrumandaminoacidanaIysis.Results：TheproteogIycanscouIdbeefficientIyre-movedby4moI/LguanidinehydrochIoride.ThebetterresuItswereobtainedbyIimitedenzymedigestionofpepsinaddedbytwosteps.TheoptimizingconcentrationofsodiumchIorideforsaItingC!was2.4moI/L.ItwasfoundthatthebandsofpurifiedC

6、!andSigmaC!wereatthesameIocationbySDS-PAGE.Theabsorptionpeakwasat230nm.TheconcentrationsofGLY，PROandALAwerehighestbyaminoacida-naIysis.Conclusion：TheresuItssuggestthattheC!isoIatedfromporcinearticuIarcartiIagehashighpu-rityandaccordswiththecharacteristicsofcoIIagentype!.Theimprovedmethodwead

7、optedhassignifi-cantadvantagessuchassimpIeworkingprocess，convenientsourceofrawmateriaIandresuItreIiabiIity.［Keywords］coIIagentype!；rheumatoidarthritis；cartiIage；proteogIycan!型胶原（coIIagentype!，C!）是软骨基质的效［5］。因此，C!的提取纯化与鉴定的研究具有较主要有机成分，是关节软骨中主要细胞外间质之一。