可溶性猪软骨ⅱ型胶原蛋白的提取与鉴定

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1、954重庆医学2011年4月第4O卷第1O期·论著·可溶性猪软骨Ⅱ型胶原蛋白的提取与鉴定宁志刚，王富友，崔运利，熊娟，杨柳△(第三军医大学西南医院关节中心，重庆400038)摘要：目的从猪膝关节软骨中提取纯化Ⅱ型胶原蛋白，并对其进行鉴定。方法选择猪膝关节软骨为提取原料，用盐酸胍去除蛋白多糖、胃蛋白酶两步消化、氯化钠盐析、超纯水透析、离心浓缩等方法提取纯化Ⅱ型胶原蛋白；采用SDS-PAGE、氨基酸成分分析对提取的Ⅱ型胶原蛋白进行鉴定；利用冻干的方法计算提取的浓度。结果SDS-PAGE电泳结果显示提取的Ⅱ型胶原蛋白分子量约120kD；氨基酸成分分析显示甘氨酸、脯氨酸和丙氨

2、酸含量最高，并且可以检出羟脯氨酸、羟赖氨酸，符合Ⅱ型胶原特征；该法提取的Ⅱ型胶原蛋白浓度为66mg／mL。结论从猪关节软骨提取的Ⅱ型胶原蛋白纯度高，方法简便，提取的胶原蛋白浓度更高。关键词：II型胶原蛋白；软骨；电泳，聚丙烯酰氨凝胶doi：10．3969／j．issn．1671—8348．2011．10．008文献标识码：A文章编号：1671—8348(2011)10—0954—02IsolationandidentificationofsoluablecollagentypeIIfromporcinearticularcartilageNingZhigang，Wan

3、gFuyou，CuiYunli，XiongJuan，YangLiu(TheCenterofJointSurgery，SouthwestHospital，Chongqing400038，China)Abstract：0bjectiveToisolateandpurifycollagentypeⅡfromporcinearticularcartilageandidentifyitspurity．MethodsTheporcinearticularcartilagewasselectedasrawmateria1．Guanidinehydrochloridewaschose

4、ntowithdrawtheproteoglycans．Two-stepdigestionofpepsin，saltingofsodiumchloride，dialyzingofultrapurewater，centrifugeenrichmentwereappliedforextracting；TheidentificationwasdonebySDS-PAGEandaminoacidanalysis；TheconcentrationofextractedcollagentypeⅡwasmeasuredbycool—dry．ResultsItwasfoundthat

5、themolecularweightofextractedcollagentypeI1wasabout120KDbySDS-PAGE；Thecontent0fGLY，PROandALAwerehighestbyaminoacidanalysis，andHypro，Hylsycanbedetected。whichaccordedwiththecharacter—isticsofcollagentypeⅡ；theconcentrationofextractedcollagentypeUwas66mg／mlbycool-dry．ConclusionTheresultssug

6、gestthattheextractedcollagentype11hasthehighpurityandconcentrationwithamoreconvenientmethod．Keywords：collagentypeII；cartilage；ecectrophoresis，polyacrylamidegelⅡ型胶原蛋白(collagentypelI，CⅡ)是软骨基质的主要节收集透明软骨，剥去骨膜，生理盐水洗净沥干后切成薄片，1O有机成分，是关节软骨的主要结构蛋白。近年有研究表明，类倍体积4mol／L盐酸胍(pH7．5，0．05mol／LTris—HCI配制)

7、风湿性关节炎的发病与Ⅱ型胶原蛋白自身免疫反应有关r1]，混悬，匀浆机粉碎，8O目钢筛过滤，于4℃下搅拌48h，4℃、12美国、英国、法国、中国等国家正在进行Ⅱ型胶原蛋白治疗类风000r／rain离心30min。沉淀用0．05mol／LTris-HCl缓冲液湿性关节炎的动物及Ⅱ～Ⅲ期临床实验研究_3]，因此，Ⅱ型胶和0．5mol／L乙酸充分洗涤后，用5倍体积的胃蛋白酶消化液原蛋白的提取纯化与鉴定具有较大价值。国外的Ⅱ型胶原蛋(O．5mol／L乙酸配成1g／L)混悬，4℃下搅拌48h。同上离白价格昂贵，国内报道的提取方法条件不一，操作复杂。本研心，收集上